应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » FAM-miRNA转染小鼠骨髓间充质干细胞观察不到荧光
81/1返回列表
查看: 1835  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

米老鼠的树

银虫 (小有名气)

[求助] FAM-miRNA转染小鼠骨髓间充质干细胞观察不到荧光 已有3人参与

本人用FAM-miRNA转染mMSCs，转染试剂是用的Invitrogen公司的lipo2000，转染步骤也是按照说明书做的。lipo2000和miRNA孵育的过程用的是不含血清的完全培养基而不是优化培养基，但这个影响不大吧？也说可以用不含血清的完全培养基的对吧~接种的细胞的密度是4万/孔（24孔板）。孵育了4~5个小时，用荧光显微镜观察，看不到荧光，但是背底的荧光很强。FAM-miRNA是用的公司合成的，应该没问题。想请教一下各位，问题出在哪儿了？再有，想请教一下大家干细胞转染与其他细胞转染的一些区别，因为看资料干细胞转染要比其他细胞类型难一些对吧？谢谢各位啦~~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
peace
1楼 2014-02-25 11:10:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ifyousee

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-25 13:01:43
米老鼠的树: 金币+3, ★有帮助 2014-02-26 12:57:06
建议先试下一般的荧光载体转染实验。这样可以熟悉下显微镜操作、转染流程等等的。
另外我一般是转染24h以后再看细胞荧光的。有些细胞系是比较难转染或是难表达外源基因的，这个也是必须承认的
赞一下 回复此楼
2楼2014-02-25 12:56:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

米老鼠的树

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ifyousee at 2014-02-25 12:56:35
建议先试下一般的荧光载体转染实验。这样可以熟悉下显微镜操作、转染流程等等的。
另外我一般是转染24h以后再看细胞荧光的。有些细胞系是比较难转染或是难表达外源基因的，这个也是必须承认的

谢谢。我也试过24h的，也是观察不到荧光。
赞一下 回复此楼
peace
3楼2014-02-25 14:46:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-25 21:52:00
米老鼠的树: 金币+2, ★有帮助 2014-02-26 12:56:54
1、很多细胞用lip2000转染效率不高，MSC的效率应该非常低。
2、lip2000转染不能含有双抗，转到细胞内可能对细胞有害。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2014-02-25 15:38:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

alxz

铁杆木虫 (职业作家)

其实我是一只大老鼠

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-25 21:52:10
米老鼠的树: 金币+5, ★有帮助 2014-02-26 12:56:40
你用的是带荧光的miRNA，而非细胞自发荧光
用荧光显微镜观测前，要排除载miRNA的liposome的干扰

建议观测时间定为8h，观测前换液操作中多用PBS洗几次细胞
如果miRNA已进入细胞的话，洗涤多次也不会影响
赞一下 回复此楼
风起，夜未央~流年，乱浮生
5楼2014-02-25 20:29:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

米老鼠的树

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by alxz at 2014-02-25 20:29:22
你用的是带荧光的miRNA，而非细胞自发荧光
用荧光显微镜观测前，要排除载miRNA的liposome的干扰

建议观测时间定为8h，观测前换液操作中多用PBS洗几次细胞
如果miRNA已进入细胞的话，洗涤多次也不会影响

谢谢！
回复此楼
peace
6楼2014-02-26 12:55:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

米老鼠的树

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-02-25 15:38:07
1、很多细胞用lip2000转染效率不高，MSC的效率应该非常低。
2、lip2000转染不能含有双抗，转到细胞内可能对细胞有害。

对啊。这挺愁的。
回复此楼
peace
7楼2014-02-26 12:56:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1209253646

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 米老鼠的树 at 2014-02-26 12:56:17
对啊。这挺愁的。...

愁死了，之前都没有做过细胞的师兄师姐，老板让我做BMSC，愁死了
赞一下 回复此楼
8楼2016-02-26 11:02:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 米老鼠的树 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭