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米老鼠的树

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[求助] FAM-miRNA转染小鼠骨髓间充质干细胞观察不到荧光已有3人参与

本人用FAM-miRNA转染mMSCs，转染试剂是用的Invitrogen公司的lipo2000，转染步骤也是按照说明书做的。lipo2000和miRNA孵育的过程用的是不含血清的完全培养基而不是优化培养基，但这个影响不大吧？也说可以用不含血清的完全培养基的对吧~接种的细胞的密度是4万/孔（24孔板）。孵育了4~5个小时，用荧光显微镜观察，看不到荧光，但是背底的荧光很强。FAM-miRNA是用的公司合成的，应该没问题。想请教一下各位，问题出在哪儿了？再有，想请教一下大家干细胞转染与其他细胞转染的一些区别，因为看资料干细胞转染要比其他细胞类型难一些对吧？谢谢各位啦~~

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peace

1楼 2014-02-25 11:10:20

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

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引用回帖:

2楼: Originally posted by ifyousee at 2014-02-25 12:56:35
建议先试下一般的荧光载体转染实验。这样可以熟悉下显微镜操作、转染流程等等的。
另外我一般是转染24h以后再看细胞荧光的。有些细胞系是比较难转染或是难表达外源基因的，这个也是必须承认的

谢谢。我也试过24h的，也是观察不到荧光。