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米老鼠的树

银虫 (小有名气)

[求助] FAM-miRNA转染小鼠骨髓间充质干细胞观察不到荧光 已有3人参与

本人用FAM-miRNA转染mMSCs,转染试剂是用的Invitrogen公司的lipo2000,转染步骤也是按照说明书做的。lipo2000和miRNA孵育的过程用的是不含血清的完全培养基而不是优化培养基,但这个影响不大吧?也说可以用不含血清的完全培养基的对吧~接种的细胞的密度是4万/孔(24孔板)。孵育了4~5个小时,用荧光显微镜观察,看不到荧光,但是背底的荧光很强。FAM-miRNA是用的公司合成的,应该没问题。想请教一下各位,问题出在哪儿了?再有,想请教一下大家干细胞转染与其他细胞转染的一些区别,因为看资料干细胞转染要比其他细胞类型难一些对吧?谢谢各位啦~~
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peace
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1209253646

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 米老鼠的树 at 2014-02-26 12:56:17
对啊。这挺愁的。...

愁死了,之前都没有做过细胞的师兄师姐,老板让我做BMSC,愁死了
8楼2016-02-26 11:02:27
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ifyousee

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-02-25 13:01:43
米老鼠的树: 金币+3, 有帮助 2014-02-26 12:57:06
建议先试下一般的荧光载体转染实验。这样可以熟悉下显微镜操作、转染流程等等的。
另外我一般是转染24h以后再看细胞荧光的。有些细胞系是比较难转染或是难表达外源基因的,这个也是必须承认的
2楼2014-02-25 12:56:35
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米老鼠的树

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ifyousee at 2014-02-25 12:56:35
建议先试下一般的荧光载体转染实验。这样可以熟悉下显微镜操作、转染流程等等的。
另外我一般是转染24h以后再看细胞荧光的。有些细胞系是比较难转染或是难表达外源基因的,这个也是必须承认的

谢谢。我也试过24h的,也是观察不到荧光。
peace
3楼2014-02-25 14:46:32
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-02-25 21:52:00
米老鼠的树: 金币+2, 有帮助 2014-02-26 12:56:54
1、很多细胞用lip2000转染效率不高,MSC的效率应该非常低。
2、lip2000转染不能含有双抗,转到细胞内可能对细胞有害。
4楼2014-02-25 15:38:07
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