24小时热门版块排行榜    

查看: 2456  |  回复: 5

happyer0

铜虫 (小有名气)

[求助] 请问如何用荧光显微镜观察甲烷菌? 已有1人参与

看文献说甲烷菌内有辅酶F420,在420nm波长的入射光激发下发射出470nm波长的荧光, 是不是要在紫外滤光片下才能直接观察到发荧光的甲烷菌?是活菌才有荧光吗?用另两片(红色和黄色)能不能看到?能不能拿厌氧发酵液直接在荧光下观察?
另外再请问荧光显微镜三个滤光片,是根据什么情况选用?在环境微生物实验中一般哪两个滤光片用得较多?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

刘兵

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
happyer0: 金币+1, 有帮助 2014-05-22 12:38:29
xuweimbf: 金币+1, 积极应助 2014-05-22 17:19:13
您的实验目的是什么?是要看甲烷菌的死活情况还是其他的目的?
滤片的目的是选择一定范围的波长,然后咱们人眼可以观测得到。
关于滤片的选择和用途建议你看看荧光显微镜的产品说明书就可以,上面有介绍。
如果是Live/dead staining 的话,需要加 染剂,然后观测。
甲烷菌我没有做过,我只做过 Nitrifying bacterial staining.
永远爱老婆!
2楼2014-05-22 12:33:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

happyer0

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 刘兵 at 2014-05-22 12:33:02
您的实验目的是什么?是要看甲烷菌的死活情况还是其他的目的?
滤片的目的是选择一定范围的波长,然后咱们人眼可以观测得到。
关于滤片的选择和用途建议你看看荧光显微镜的产品说明书就可以,上面有介绍。
如果是 ...

谢谢您的回复。我是想看看厌氧培养液里面到底有没有甲烷菌。因为培养很久了,也看到液体里有气泡出现,但是似乎没有多少的产气量。
实验室里用的是尼康荧光显微镜,我对荧光这滤光片作用不太了解,因为看文献上说的是辅酶F420,在420nm波长的入射光激发下发射出470nm波长的荧光,而一个滤光片是在450-490nm的,而紫外滤光片应该在450nm以下,可是我们刚好缺这紫外的,所以我不知道是要在哪一个波段下观察甲烷菌才好,因此才有上述问题。
3楼2014-05-22 12:45:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

刘兵

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by happyer0 at 2014-05-22 13:45:32
谢谢您的回复。我是想看看厌氧培养液里面到底有没有甲烷菌。因为培养很久了,也看到液体里有气泡出现,但是似乎没有多少的产气量。
实验室里用的是尼康荧光显微镜,我对荧光这滤光片作用不太了解,因为看文献上说 ...

1.产甲烷菌的种类众多,因基质和反应条件不同也会呈现出不同的种类分布,外形规则也有 不规则球星 杆状 短杆状 链球状等等。目前常用的检测方法应该是 PCR-DGGE。
2.液体气泡产生不一定就是甲烷,也可能是CO2。 如果可能的话 何不用气相色谱先走个样看看是否有甲烷气体存在,然后再做下一步计划。毕竟显微镜的误差比较大。
3.在甲烷菌分子生物学中,日本东北大学的李玉友老师做的不错,您可以看看他实验室的文章。
永远爱老婆!
4楼2014-05-22 14:54:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

happyer0

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 刘兵 at 2014-05-22 14:54:58
1.产甲烷菌的种类众多,因基质和反应条件不同也会呈现出不同的种类分布,外形规则也有 不规则球星 杆状 短杆状 链球状等等。目前常用的检测方法应该是 PCR-DGGE。
2.液体气泡产生不一定就是甲烷,也可能是CO2。 如 ...

谢谢您的指点!
5楼2014-05-22 16:12:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

happyer0

铜虫 (小有名气)

★ ★
vaughn: 金币+2, 以学术交流的思想来发帖,并给出别人的回复,非常好 2014-05-25 07:08:37
因为着急解决这个问题,在微生物版块上先发了求助帖,收到 liujianmin68的 回复:1. 甲烷菌是有辅酶F420,且能用荧光显微镜观察到荧光。420nm下有荧光激发出,所以应该选择紫外滤光片观察,你描述的没错。
2. 是活菌才能观察,并且因为甲烷菌是严格厌氧菌,所以观察过程尽可能快些,活的甲烷菌能发荧光,但在观察过程中,能看到荧光强度一直在减弱。所以,想取得较好的观察效果,最好在几分钟内完成。
3. 可以取发酵液直接观察,甲烷菌较小,单个菌的荧光较弱,所以,我们观察时,一般用40倍物镜,观察群体的荧光。
4. 其它的滤光片颜色激发波长有直接的关系,在细胞生物学研究中,有红色、绿色、黄色等不同的荧光标记,这时候就可以用不同的荧光滤片了。

考虑到可能有些人也不明白,所以将以上回答贴于此。
6楼2014-05-23 11:27:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 happyer0 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 279分求调剂 一志愿211 +16 chaojifeixia 2026-03-19 18/900 2026-03-23 19:44 by stone_128
[考研] 303求调剂 +4 元夕元 2026-03-20 4/200 2026-03-23 19:00 by macy2011
[考研] 工科0856求调剂 +5 沐析汀汀 2026-03-21 5/250 2026-03-23 17:56 by 海瑟薇-
[考研] 350求调剂 +6 weudhdk 2026-03-19 6/300 2026-03-23 15:47 by tangyuan0840221
[考研] 北科281学硕材料求调剂 +8 tcxiaoxx 2026-03-20 9/450 2026-03-23 12:16 by tcxiaoxx
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-21 3/150 2026-03-23 10:32 by Iveryant
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +11 梨花珞晚风 2026-03-17 11/550 2026-03-22 17:42 by luoyongfeng
[考研] 寻找调剂 +4 倔强芒? 2026-03-21 4/200 2026-03-22 16:14 by 木托莫露露
[考研] 311求调剂 +3 26研0 2026-03-20 3/150 2026-03-22 14:46 by ColorlessPI
[考研] 生物学调剂 +5 Surekei 2026-03-21 5/250 2026-03-22 14:39 by tcx007
[考研] 求调剂 +5 Zhangbod 2026-03-21 7/350 2026-03-22 13:13 by Zhangbod
[考研] 材料求调剂 +5 @taotao 2026-03-21 5/250 2026-03-21 20:55 by lbsjt
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-20 7/350 2026-03-21 19:05 by 15709483992
[考研] 材料工程专硕 348分求调剂 +3 冬辞. 2026-03-17 5/250 2026-03-21 18:47 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿南昌大学,327分,材料与化工085600 +9 Ncdx123456 2026-03-19 9/450 2026-03-20 23:41 by lovewei0727
[考研] 321求调剂 +9 何润采123 2026-03-18 11/550 2026-03-20 23:19 by JourneyLucky
[考研] 330求调剂 +4 小材化本科 2026-03-18 4/200 2026-03-20 23:13 by JourneyLucky
[论文投稿] 申请回稿延期一个月,编辑同意了。但系统上的时间没变,给编辑又写邮件了,没回复 10+3 wangf9518 2026-03-17 4/200 2026-03-19 23:55 by babero
[考研] 一志愿福大288有机化学,求调剂 +3 小木虫200408204 2026-03-18 3/150 2026-03-19 13:31 by houyaoxu
[考研] 085600材料与化工求调剂 +6 绪幸与子 2026-03-17 6/300 2026-03-19 13:27 by houyaoxu
信息提示
请填处理意见