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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 环境 » 交流探讨 » 请问如何用荧光显微镜观察甲烷菌？
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happyer0

铜虫 (小有名气)

[求助] 请问如何用荧光显微镜观察甲烷菌？ 已有1人参与

看文献说甲烷菌内有辅酶F420，在420nm波长的入射光激发下发射出470nm波长的荧光， 是不是要在紫外滤光片下才能直接观察到发荧光的甲烷菌？是活菌才有荧光吗？用另两片（红色和黄色）能不能看到？能不能拿厌氧发酵液直接在荧光下观察？
另外再请问荧光显微镜三个滤光片，是根据什么情况选用？在环境微生物实验中一般哪两个滤光片用得较多？
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1楼 2014-05-22 12:12:49
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刘兵

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
happyer0: 金币+1, ★有帮助 2014-05-22 12:38:29
xuweimbf: 金币+1, 积极应助 2014-05-22 17:19:13
您的实验目的是什么？是要看甲烷菌的死活情况还是其他的目的？
滤片的目的是选择一定范围的波长，然后咱们人眼可以观测得到。
关于滤片的选择和用途建议你看看荧光显微镜的产品说明书就可以，上面有介绍。
如果是Live/dead staining 的话，需要加 染剂，然后观测。
甲烷菌我没有做过，我只做过 Nitrifying bacterial staining.
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永远爱老婆！
2楼2014-05-22 12:33:02
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happyer0

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 刘兵 at 2014-05-22 12:33:02
您的实验目的是什么？是要看甲烷菌的死活情况还是其他的目的？
滤片的目的是选择一定范围的波长，然后咱们人眼可以观测得到。
关于滤片的选择和用途建议你看看荧光显微镜的产品说明书就可以，上面有介绍。
如果是 ...

谢谢您的回复。我是想看看厌氧培养液里面到底有没有甲烷菌。因为培养很久了，也看到液体里有气泡出现，但是似乎没有多少的产气量。
实验室里用的是尼康荧光显微镜，我对荧光这滤光片作用不太了解，因为看文献上说的是辅酶F420，在420nm波长的入射光激发下发射出470nm波长的荧光，而一个滤光片是在450-490nm的，而紫外滤光片应该在450nm以下，可是我们刚好缺这紫外的，所以我不知道是要在哪一个波段下观察甲烷菌才好，因此才有上述问题。
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3楼2014-05-22 12:45:32
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刘兵

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by happyer0 at 2014-05-22 13:45:32
谢谢您的回复。我是想看看厌氧培养液里面到底有没有甲烷菌。因为培养很久了，也看到液体里有气泡出现，但是似乎没有多少的产气量。
实验室里用的是尼康荧光显微镜，我对荧光这滤光片作用不太了解，因为看文献上说 ...

1.产甲烷菌的种类众多，因基质和反应条件不同也会呈现出不同的种类分布，外形规则也有 不规则球星 杆状 短杆状 链球状等等。目前常用的检测方法应该是 PCR-DGGE。
2.液体气泡产生不一定就是甲烷，也可能是CO2。 如果可能的话 何不用气相色谱先走个样看看是否有甲烷气体存在，然后再做下一步计划。毕竟显微镜的误差比较大。
3.在甲烷菌分子生物学中，日本东北大学的李玉友老师做的不错，您可以看看他实验室的文章。
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永远爱老婆！
4楼2014-05-22 14:54:58
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happyer0

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 刘兵 at 2014-05-22 14:54:58
1.产甲烷菌的种类众多，因基质和反应条件不同也会呈现出不同的种类分布，外形规则也有 不规则球星 杆状 短杆状 链球状等等。目前常用的检测方法应该是 PCR-DGGE。
2.液体气泡产生不一定就是甲烷，也可能是CO2。 如 ...

谢谢您的指点！
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5楼2014-05-22 16:12:27
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happyer0

铜虫 (小有名气)
★ ★
vaughn: 金币+2, 以学术交流的思想来发帖，并给出别人的回复，非常好 2014-05-25 07:08:37
因为着急解决这个问题，在微生物版块上先发了求助帖，收到 liujianmin68的 回复：1. 甲烷菌是有辅酶F420，且能用荧光显微镜观察到荧光。420nm下有荧光激发出，所以应该选择紫外滤光片观察，你描述的没错。
2. 是活菌才能观察，并且因为甲烷菌是严格厌氧菌，所以观察过程尽可能快些，活的甲烷菌能发荧光，但在观察过程中，能看到荧光强度一直在减弱。所以，想取得较好的观察效果，最好在几分钟内完成。
3. 可以取发酵液直接观察，甲烷菌较小，单个菌的荧光较弱，所以，我们观察时，一般用40倍物镜，观察群体的荧光。
4. 其它的滤光片颜色激发波长有直接的关系，在细胞生物学研究中，有红色、绿色、黄色等不同的荧光标记，这时候就可以用不同的荧光滤片了。

考虑到可能有些人也不明白，所以将以上回答贴于此。
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6楼2014-05-23 11:27:39
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