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happyer0

铜虫 (小有名气)

[求助] 请问如何用荧光显微镜观察甲烷菌? 已有1人参与

看文献说甲烷菌内有辅酶F420,在420nm波长的入射光激发下发射出470nm波长的荧光, 是不是要在紫外滤光片下才能直接观察到发荧光的甲烷菌?是活菌才有荧光吗?用另两片(红色和黄色)能不能看到?能不能拿厌氧发酵液直接在荧光下观察?
另外再请问荧光显微镜三个滤光片,是根据什么情况选用?在环境微生物实验中一般哪两个滤光片用得较多?
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happyer0

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 刘兵 at 2014-05-22 12:33:02
您的实验目的是什么?是要看甲烷菌的死活情况还是其他的目的?
滤片的目的是选择一定范围的波长,然后咱们人眼可以观测得到。
关于滤片的选择和用途建议你看看荧光显微镜的产品说明书就可以,上面有介绍。
如果是 ...

谢谢您的回复。我是想看看厌氧培养液里面到底有没有甲烷菌。因为培养很久了,也看到液体里有气泡出现,但是似乎没有多少的产气量。
实验室里用的是尼康荧光显微镜,我对荧光这滤光片作用不太了解,因为看文献上说的是辅酶F420,在420nm波长的入射光激发下发射出470nm波长的荧光,而一个滤光片是在450-490nm的,而紫外滤光片应该在450nm以下,可是我们刚好缺这紫外的,所以我不知道是要在哪一个波段下观察甲烷菌才好,因此才有上述问题。
3楼2014-05-22 12:45:32
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刘兵

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
happyer0: 金币+1, 有帮助 2014-05-22 12:38:29
xuweimbf: 金币+1, 积极应助 2014-05-22 17:19:13
您的实验目的是什么?是要看甲烷菌的死活情况还是其他的目的?
滤片的目的是选择一定范围的波长,然后咱们人眼可以观测得到。
关于滤片的选择和用途建议你看看荧光显微镜的产品说明书就可以,上面有介绍。
如果是Live/dead staining 的话,需要加 染剂,然后观测。
甲烷菌我没有做过,我只做过 Nitrifying bacterial staining.
永远爱老婆!
2楼2014-05-22 12:33:02
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刘兵

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by happyer0 at 2014-05-22 13:45:32
谢谢您的回复。我是想看看厌氧培养液里面到底有没有甲烷菌。因为培养很久了,也看到液体里有气泡出现,但是似乎没有多少的产气量。
实验室里用的是尼康荧光显微镜,我对荧光这滤光片作用不太了解,因为看文献上说 ...

1.产甲烷菌的种类众多,因基质和反应条件不同也会呈现出不同的种类分布,外形规则也有 不规则球星 杆状 短杆状 链球状等等。目前常用的检测方法应该是 PCR-DGGE。
2.液体气泡产生不一定就是甲烷,也可能是CO2。 如果可能的话 何不用气相色谱先走个样看看是否有甲烷气体存在,然后再做下一步计划。毕竟显微镜的误差比较大。
3.在甲烷菌分子生物学中,日本东北大学的李玉友老师做的不错,您可以看看他实验室的文章。
永远爱老婆!
4楼2014-05-22 14:54:58
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happyer0

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 刘兵 at 2014-05-22 14:54:58
1.产甲烷菌的种类众多,因基质和反应条件不同也会呈现出不同的种类分布,外形规则也有 不规则球星 杆状 短杆状 链球状等等。目前常用的检测方法应该是 PCR-DGGE。
2.液体气泡产生不一定就是甲烷,也可能是CO2。 如 ...

谢谢您的指点!
5楼2014-05-22 16:12:27
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