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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 绿色荧光的观察
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yesucao

木虫 (正式写手)

[交流] 绿色荧光的观察

本人目前在做绿色荧光蛋白标记，已经构建好载体，转DH5a，也电转了自己的枯草芽孢杆菌，今天用荧光正置显微镜观察绿色荧光的时候，发现不管什么转化或者没转化的菌种只要放上去都有绿色荧光出现，DH5a、枯草芽孢杆菌这些明知是不会出现荧光的也出现了，，而且荧光也只能是在低倍数上观察，倍数高了还看不到了，不知道该怎么办才好啊，还请各位帮我分析一下。
实验室的荧光正置显微镜型号为 ECLIPSEV80i
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1楼2011-10-25 18:57:04
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yesucao

木虫 (正式写手)
引用回帖:
25楼: Originally posted by cy0708040 at 2011-10-26 11:28:37:
细胞内的蛋白、核酸等正常成分都有自发荧光，如果你构建的荧光蛋白大量表达，强对比下CCD会过滤掉那些背景的。

今天上午直接在平板上挖一点LB固体培养基制片，放在显微镜上也能看到绿色的
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26楼2011-10-26 13:57:17
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★
yesucao(金币+1):谢谢参与
wanhscn(金币+2): 同意！鼓励交流！ 2011-10-26 11:08:11
可能是背景吧。你看看没有菌的地方是不是也有荧光？
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2楼2011-10-25 21:32:23
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三目

木虫 (小有名气)
★ ★
yesucao(金币+1):谢谢参与
wanhscn(金币+1): 鼓励交流 2011-10-26 11:12:46
你应该是没有去除背景吧，荧光标记的地方一般是高亮的
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2011-10-25 21:38:02
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tianchongmy

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
yesucao(金币+1):谢谢参与
wanhscn(金币+2): 鼓励应助！ 2011-10-26 11:08:21
肯定是背景，楼主你确定可以在DH5a里表达吗，它的表达量会很低的吧，建议转化一个高效表达的菌看看，可能亮度就更高了
赞一下(3人) 回复此楼
6楼2011-10-25 23:51:45
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springsunyj14楼
2011-10-26 08:06   回复  
yesucao(金币+1):谢谢参与
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