应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 绿色荧光的观察
301/1返回列表
查看: 2409  |  回复: 29
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

yesucao

木虫 (正式写手)

[交流] 绿色荧光的观察

本人目前在做绿色荧光蛋白标记，已经构建好载体，转DH5a，也电转了自己的枯草芽孢杆菌，今天用荧光正置显微镜观察绿色荧光的时候，发现不管什么转化或者没转化的菌种只要放上去都有绿色荧光出现，DH5a、枯草芽孢杆菌这些明知是不会出现荧光的也出现了，，而且荧光也只能是在低倍数上观察，倍数高了还看不到了，不知道该怎么办才好啊，还请各位帮我分析一下。
实验室的荧光正置显微镜型号为 ECLIPSEV80i
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

紫外荧光

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-10-25 18:57:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

tianchongmy

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
yesucao(金币+1):谢谢参与
wanhscn(金币+2): 鼓励应助！ 2011-10-26 11:08:21
肯定是背景，楼主你确定可以在DH5a里表达吗，它的表达量会很低的吧，建议转化一个高效表达的菌看看，可能亮度就更高了
赞一下(3人) 回复此楼
6楼2011-10-25 23:51:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★
yesucao(金币+1):谢谢参与
wanhscn(金币+2): 同意！鼓励交流！ 2011-10-26 11:08:11
可能是背景吧。你看看没有菌的地方是不是也有荧光？
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-10-25 21:32:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三目

木虫 (小有名气)
★ ★
yesucao(金币+1):谢谢参与
wanhscn(金币+1): 鼓励交流 2011-10-26 11:12:46
你应该是没有去除背景吧，荧光标记的地方一般是高亮的
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2011-10-25 21:38:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kukoob

铁杆木虫 (知名作家)
★
yesucao(金币+1):谢谢参与
背景！
回复此楼
5楼2011-10-25 22:41:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone_66

木虫 (小有名气)
★
yesucao(金币+1):谢谢参与
是否高亮？
回复此楼
8楼2011-10-26 06:33:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Hugbum-Xia

金虫 (著名写手)
★
yesucao(金币+1):谢谢参与
路过，祝顺利
回复此楼
16楼2011-10-26 08:16:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yesucao

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-10-25 21:32:23:
可能是背景吧。你看看没有菌的地方是不是也有荧光？

我是直接挑取平板上的一环菌体制片的，没有菌的地方没有荧光，为黑色，这个看的很清楚，有菌体的地方就是绿色，菌体没有打散的地方，绿色就稍亮一些
赞一下 回复此楼
21楼2011-10-26 09:31:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yesucao

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 三目 at 2011-10-25 21:38:02:
你应该是没有去除背景吧，荧光标记的地方一般是高亮的

去除背景？？怎么去除呢，荧光显微镜观察的时候用的是彩色拍照的，与电脑上面的一个软件相连接，是直接在电脑上操作吗？？目前实验室的那台荧光显微镜没几个人使用，一些不常用的功能有些我们还不知道
赞一下 回复此楼
22楼2011-10-26 09:36:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yesucao

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by tianchongmy at 2011-10-25 23:51:45:
肯定是背景，楼主你确定可以在DH5a里表达吗，它的表达量会很低的吧，建议转化一个高效表达的菌看看，可能亮度就更高了

你们所说的背景是指的什么？？印象中有篇文献上面提到能在DH5a中看到荧光，质粒里面包含了一个强启动子，目前的话我也将这个质粒电击到苏云金芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌中，昨天也一起看过了，这两个菌看到的也差不多的颜色，比单纯的DH5a颜色要亮一些。
在高倍镜下看荧光的话，电脑扫描不出来，看不到，不能拍照，
赞一下 回复此楼
23楼2011-10-26 09:49:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cy0708040

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
细胞内的蛋白、核酸等正常成分都有自发荧光，如果你构建的荧光蛋白大量表达，强对比下CCD会过滤掉那些背景的。
赞一下(1人) 回复此楼
25楼2011-10-26 11:28:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yesucao

木虫 (正式写手)
引用回帖:
25楼: Originally posted by cy0708040 at 2011-10-26 11:28:37:
细胞内的蛋白、核酸等正常成分都有自发荧光，如果你构建的荧光蛋白大量表达，强对比下CCD会过滤掉那些背景的。

今天上午直接在平板上挖一点LB固体培养基制片，放在显微镜上也能看到绿色的
赞一下 回复此楼
26楼2011-10-26 13:57:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tdong06

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
哈哈，楼主恭喜你，你的菌本来就有自然荧光，不需要标记就可以看的。
开个玩笑哈。
赞一下(1人) 回复此楼
27楼2011-10-29 21:31:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tdong06

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
哈哈，楼主恭喜你，你的菌本来就有自然荧光，不需要标记就可以看的。
开个玩笑哈。
赞一下(1人) 回复此楼
28楼2011-10-29 21:36:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xissy

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
26楼: Originally posted by yesucao at 2011-10-26 13:57:17
今天上午直接在平板上挖一点LB固体培养基制片，放在显微镜上也能看到绿色的...

一些底物本来就会有荧光。问题是荧光亮不亮。而且需要去除背景的。
赞一下 回复此楼
29楼2014-09-12 10:46:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chshchwh

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
26楼: Originally posted by yesucao at 2011-10-26 13:57:17
今天上午直接在平板上挖一点LB固体培养基制片，放在显微镜上也能看到绿色的...

楼主，我也遇到了同样的问题，请问是如何解决的？
赞一下 回复此楼
30楼2015-03-10 21:11:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
gxsun4楼
2011-10-25 22:11   回复  
yesucao(金币+1):谢谢参与
jakelly7楼
2011-10-26 01:13   回复  
yesucao(金币+1):谢谢参与
mapa6759楼
2011-10-26 07:41   回复  
yesucao(金币+1):谢谢参与
198610楼
2011-10-26 07:51   回复  
yesucao(金币+1):谢谢参与
dld12311楼
2011-10-26 07:57   回复  
yesucao(金币+1):谢谢参与
zhangjunjuan12楼
2011-10-26 08:03   回复  
yesucao(金币+1):谢谢参与
davidfrela13楼
2011-10-26 08:05   回复  
yesucao(金币+1):谢谢参与
springsunyj14楼
2011-10-26 08:06   回复  
yesucao(金币+1):谢谢参与
xcjcqu15楼
2011-10-26 08:13   回复  
yesucao(金币+1):谢谢参与
jihaili17楼
2011-10-26 08:21   回复  
yesucao(金币+1):谢谢参与
zlh80052218楼
2011-10-26 08:27   回复  
yesucao(金币+1):谢谢参与
swma19楼
2011-10-26 08:30   回复  
yesucao(金币+1):谢谢参与
大轰炸20楼
2011-10-26 08:39   回复  
yesucao(金币+1):谢谢参与
hqwzj198724楼
2011-10-26 10:42   回复  
yesucao(金币+1):谢谢参与
相关版块跳转 我要订阅楼主 yesucao 的主题更新
301/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭