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yesucao

木虫 (正式写手)


[交流] 绿色荧光的观察

本人目前在做绿色荧光蛋白标记,已经构建好载体,转DH5a,也电转了自己的枯草芽孢杆菌,今天用荧光正置显微镜观察绿色荧光的时候,发现不管什么转化或者没转化的菌种只要放上去都有绿色荧光出现,DH5a、枯草芽孢杆菌这些明知是不会出现荧光的也出现了,,而且荧光也只能是在低倍数上观察,倍数高了还看不到了,不知道该怎么办才好啊,还请各位帮我分析一下。
实验室的荧光正置显微镜型号为 ECLIPSEV80i
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xissy

铜虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
26楼: Originally posted by yesucao at 2011-10-26 13:57:17
今天上午直接在平板上挖一点LB固体培养基制片,放在显微镜上也能看到绿色的...

一些底物本来就会有荧光。问题是荧光亮不亮。而且需要去除背景的。
29楼2014-09-12 10:46:51
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查看全部 30 个回答
★ ★ ★
yesucao(金币+1):谢谢参与
wanhscn(金币+2): 同意!鼓励交流! 2011-10-26 11:08:11
可能是背景吧。你看看没有菌的地方是不是也有荧光?
2楼2011-10-25 21:32:23
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三目

木虫 (小有名气)


★ ★
yesucao(金币+1):谢谢参与
wanhscn(金币+1): 鼓励交流 2011-10-26 11:12:46
你应该是没有去除背景吧,荧光标记的地方一般是高亮的
3楼2011-10-25 21:38:02
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tianchongmy

铁杆木虫 (著名写手)


★ ★ ★
yesucao(金币+1):谢谢参与
wanhscn(金币+2): 鼓励应助! 2011-10-26 11:08:21
肯定是背景,楼主你确定可以在DH5a里表达吗,它的表达量会很低的吧,建议转化一个高效表达的菌看看,可能亮度就更高了
6楼2011-10-25 23:51:45
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简单回复
2011-10-26 08:06   回复  
yesucao(金币+1):谢谢参与
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