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绿色荧光的观察
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yesucao
木虫
(正式写手)
MolEPI: 2
应助: 51
(初中生)
金币: 3877.1
帖子: 374
在线: 203.4小时
虫号: 810829
[交流]
绿色荧光的观察
本人目前在做绿色荧光蛋白标记,已经构建好载体,转DH5a,也电转了自己的枯草芽孢杆菌,今天用荧光正置显微镜观察绿色荧光的时候,发现不管什么转化或者没转化的菌种只要放上去都有绿色荧光出现,DH5a、枯草芽孢杆菌这些明知是不会出现荧光的也出现了,
,而且荧光也只能是在低倍数上观察,倍数高了还看不到了,不知道该怎么办才好啊,还请各位帮我分析一下。
实验室的荧光正置显微镜型号为 ECLIPSEV80i
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2011-10-25 18:57:04
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cy0708040
铁虫
(初入文坛)
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帖子: 29
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虫号: 1430938
★
小木虫(金币
+0.5
):给个红包,谢谢回帖
细胞内的蛋白、核酸等正常成分都有自发荧光,如果你构建的荧光蛋白大量表达,强对比下CCD会过滤掉那些背景的。
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25楼
2011-10-26 11:28:37
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西瓜
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帖子: 7553
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虫号: 271749
★ ★ ★
yesucao(金币
+1
):谢谢参与
wanhscn(金币+2): 同意!鼓励交流! 2011-10-26 11:08:11
可能是背景吧。你看看没有菌的地方是不是也有荧光?
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2楼
2011-10-25 21:32:23
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木虫
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★ ★
yesucao(金币
+1
):谢谢参与
wanhscn(金币+1): 鼓励交流 2011-10-26 11:12:46
你应该是没有去除背景吧,荧光标记的地方一般是高亮的
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3楼
2011-10-25 21:38:02
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tianchongmy
铁杆木虫
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★ ★ ★
yesucao(金币
+1
):谢谢参与
wanhscn(金币+2): 鼓励应助! 2011-10-26 11:08:21
肯定是背景,楼主你确定可以在DH5a里表达吗,它的表达量会很低的吧,建议转化一个高效表达的菌看看,可能亮度就更高了
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6楼
2011-10-25 23:51:45
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springsunyj
14楼
2011-10-26 08:06
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yesucao(金币
+1
):谢谢参与
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