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chenct002

金虫 (小有名气)

[求助] 丙酮沉淀蛋白后怎么溶解 已有5人参与

想请教各位,从细胞里面提取蛋白后,-20度丙酮沉淀蛋白,然后离心,请问离心的转速是不是不能太大?离心时间多久适宜?文献上是12000r,15min,我觉得这个是不是不行,离心太久后蛋白变成很硬的一团粘在EP管底部,怎么涡都涡不起来,超声2个小时也溶解不了?请问怎么解决?
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lwpeng

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
chenct002(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-12-07 15:52:53
chenct002: 金币+5 2014-12-07 15:53:34
丙酮沉淀后用酒精清洗晾干的时候,不能让蛋白过度干燥,否则溶解是很困难的。
4楼2014-12-06 22:36:32
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
chenct002: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-12-07 15:51:32
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-12-07 15:52:35
我做过从肝脏提取碱性磷酸酶,冷丙酮沉淀后,2000rpm离心5分钟,然后用tris缓冲液溶解的。
2楼2014-12-06 15:50:54
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guoliwang

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-12-07 15:52:43
chenct002: 金币+2, 有帮助 2014-12-07 15:53:09
转速和时间最初参考相应参考文献,也要根据自己的实验目的和结果调整。溶解液必须用你后续实验的溶液。
慎思明辨博学笃行
3楼2014-12-06 17:06:26
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-12-07 15:53:01
chenct002: 金币+2, 有帮助 2014-12-07 15:54:49
SDS+超声
字数补丁
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
5楼2014-12-07 02:30:19
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