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北极企鹅1111

银虫 (初入文坛)

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[求助] 提取得到的野生型质粒酶切总是不成功已有1人参与

分离得到的侧孢芽孢杆菌，提取出质粒了，大小在10k左右，想酶切一下送去测序呢，可是酶切总是不成功，偶尔有一次切出了点2000左右的，可是再重复就没有了~然后就是试各种酶，但是大部分都切不开，偶尔有几个能切开的还都是弥散，根本没法回收，求帮助啊~怎么才能切好呢~

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【求助/交流】为什么酶切总是切不开？已经有12人回复

1楼 2014-12-05 11:16:12

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susie1213

木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

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北极企鹅1111(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-12-07 19:40:06

我觉得这个和野生型大肠杆菌提取质粒遇到的问题可能有点类似。大肠杆菌中用于做克隆或者扩增质粒的菌株都有endA1缺陷，不然提出的质粒往往不能用于做克隆，这种质粒用来做转化没有问题，但是用酶切就会一片弥散。这种情况下要用小提试剂盒里面的去蛋白液处理刚刚提出来的质粒，再用处理后的质粒进行酶切，就一切正常了！！！

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