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北极企鹅1111

银虫 (初入文坛)

[求助] 提取得到的野生型质粒酶切总是不成功 已有1人参与

分离得到的侧孢芽孢杆菌,提取出质粒了,大小在10k左右,想酶切一下送去测序呢,可是酶切总是不成功,偶尔有一次切出了点2000左右的,可是再重复就没有了~然后就是试各种酶,但是大部分都切不开,偶尔有几个能切开的还都是弥散,根本没法回收,求帮助啊~怎么才能切好呢~
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susie1213

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
北极企鹅1111(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-12-07 19:40:06
我觉得这个和野生型大肠杆菌提取质粒遇到的问题可能有点类似。大肠杆菌中用于做克隆或者扩增质粒的菌株都有endA1缺陷,不然提出的质粒往往不能用于做克隆,这种质粒用来做转化没有问题,但是用酶切就会一片弥散。这种情况下要用小提试剂盒里面的去蛋白液处理刚刚提出来的质粒,再用处理后的质粒进行酶切,就一切正常了!!!
susie加油!
2楼2014-12-07 17:37:17
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