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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 蛋白纯化柱子
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aijingqian

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白纯化柱子 已有5人参与

PET32表达载体 目的蛋白70KDa 准备用最方便的柱子纯化，本实验室已有His.band Purification Kit 纯化柱，但在以往纯化的过程中目的蛋白挂不上柱子。现在想换一下其他柱子纯化，望各位大侠多多推荐哈
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1楼 2014-12-04 17:45:29
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有时候一端折叠进去蛋白质内部，把标签放在另一端就可以吸附了
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2014-12-05 16:50:44
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hajierlove

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
进口的柱子还是国产的？
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踏实
3楼2014-12-05 17:42:50
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aijingqian

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2014-12-05 16:50:44
有时候一端折叠进去蛋白质内部，把标签放在另一端就可以吸附了

那意思说把标签加到另一端序列上？
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4楼2014-12-06 15:14:14
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aijingqian

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hajierlove at 2014-12-05 17:42:50
进口的柱子还是国产的？

国产的就好了，希望把货号也说下哈！
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5楼2014-12-06 15:14:41
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
4楼: Originally posted by aijingqian at 2014-12-06 15:14:14
那意思说把标签加到另一端序列上？...

值得一试
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
6楼2014-12-06 18:47:39
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lietomepls

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

确定是柱子的问题吗？我觉得你可以先尝试一下使用不同的缓冲液，另外，国产的柱子结合效率不一般的低啊，辛辛苦苦表达出来的蛋白，就那么流掉了，不心疼吗？
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7楼2014-12-08 09:49:33
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aijingqian

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lietomepls at 2014-12-08 09:49:33
确定是柱子的问题吗？我觉得你可以先尝试一下使用不同的缓冲液，另外，国产的柱子结合效率不一般的低啊，辛辛苦苦表达出来的蛋白，就那么流掉了，不心疼吗？

有道理，但是挂不上柱子，不是蛋白的问题就是柱子的问题了
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8楼2014-12-08 10:35:38
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lietomepls

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by aijingqian at 2014-12-08 10:35:38
有道理，但是挂不上柱子，不是蛋白的问题就是柱子的问题了...

准确的说不是这样的，一般来讲，镍柱使用磷酸盐缓冲液比较多，但是在含有Tris的溶液中就会造成镍流失，这样的话蛋白肯定是挂不到柱子上了
另外缓冲液的pH也很关键，镍柱虽然可耐受的pH范围较宽，但是镍与蛋白最佳的结合pH范围很窄的。
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9楼2014-12-09 09:13:05
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aijingqian

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by lietomepls at 2014-12-09 09:13:05
准确的说不是这样的，一般来讲，镍柱使用磷酸盐缓冲液比较多，但是在含有Tris的溶液中就会造成镍流失，这样的话蛋白肯定是挂不到柱子上了
另外缓冲液的pH也很关键，镍柱虽然可耐受的pH范围较宽，但是镍与蛋白最佳 ...

那可否告诉我，最佳PH范围是？
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10楼2014-12-09 10:15:26
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