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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 蛋白纯化柱子
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lietomepls

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by aijingqian at 2014-12-09 10:15:26
那可否告诉我，最佳PH范围是？...

中性偏碱，一般不要超过8.0，我一般都是用磷酸盐缓冲液，GE公司的镍柱有说明书网上可以下载，具体步骤，溶液配制都有说明，你可以去找找看
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11楼2014-12-09 11:53:44
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aijingqian

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by lietomepls at 2014-12-09 11:53:44
中性偏碱，一般不要超过8.0，我一般都是用磷酸盐缓冲液，GE公司的镍柱有说明书网上可以下载，具体步骤，溶液配制都有说明，你可以去找找看...

好滴，非常感谢！
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12楼2014-12-10 09:41:51
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成都连接流体

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

既然你都找到GE了，为啥不考虑使用膜法分离得到高纯度的蛋白呢，方便省事
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13楼2014-12-15 14:56:02
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

挂不上柱。
1.柱子有问题，比如已损坏，或者超过使用寿命，或者以前使用不当，比如超压，是凝胶颗粒破粹等。
2.蛋白标签被包裹，或者你的蛋白压根就没表达。
3.柱子没处理好，没平衡好。
4.层析体系有问题，比如平衡液，上样液的PH，电导等等都有可能影响吸附性能。
建议：先确定蛋白表达的情况，分析样品本身，确定蛋白标签的表达及可以和亲和培基结合；确定合适的层析体系，要实验，了解柱子的性能，然后在分析是什么问题，对症下药，祝顺利。
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14楼2015-08-28 15:47:52
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