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aijingqian

新虫 (初入文坛)

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[求助] 蛋白纯化柱子已有5人参与

PET32表达载体目的蛋白70KDa 准备用最方便的柱子纯化，本实验室已有His.band Purification Kit 纯化柱，但在以往纯化的过程中目的蛋白挂不上柱子。现在想换一下其他柱子纯化，望各位大侠多多推荐哈

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1楼 2014-12-04 17:45:29

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hc-material

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【答案】应助回帖

挂不上柱。
1.柱子有问题，比如已损坏，或者超过使用寿命，或者以前使用不当，比如超压，是凝胶颗粒破粹等。
2.蛋白标签被包裹，或者你的蛋白压根就没表达。
3.柱子没处理好，没平衡好。
4.层析体系有问题，比如平衡液，上样液的PH，电导等等都有可能影响吸附性能。
建议：先确定蛋白表达的情况，分析样品本身，确定蛋白标签的表达及可以和亲和培基结合；确定合适的层析体系，要实验，了解柱子的性能，然后在分析是什么问题，对症下药，祝顺利。