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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 想把片段大小在2k-4k的片段连接到载体上，求推荐高效简便的载体
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danielyoung

银虫 (初入文坛)

[求助] 想把片段大小在2k-4k的片段连接到载体上，求推荐高效简便的载体 已有1人参与

最近用EcoRI 酶切得到了一些2k-4k的片段，想把他们与载体连接，求高手推荐一个高效的连接载体，本身不是太了解，做实验用到了，实验室有PUC19，这个可以吗？
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1楼 2014-12-02 11:04:50
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gaoxueyan188

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励新虫应助！ 2014-12-02 20:59:39
danielyoung: 金币+6, ★有帮助 2014-12-03 09:12:09
使用PUC19作为载体是没有问题的，但是要注意筛选时要用麦康凯培养基，或者用普通LB加上X-gal染料。另外菌落PCR时大于2K的片段最好不要用rTaq，可以用EXtaq。如果答案满意还请楼主赠与金币。
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2楼2014-12-02 11:15:14
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danielyoung

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gaoxueyan188 at 2014-12-02 11:15:14
使用PUC19作为载体是没有问题的，但是要注意筛选时要用麦康凯培养基，或者用普通LB加上X-gal染料。另外菌落PCR时大于2K的片段最好不要用rTaq，可以用EXtaq。如果答案满意还请楼主赠与金币。

那还有哪一种载体可用呢？
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3楼2014-12-02 20:25:52
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)
puc19,pbluescript 等都可以。我用puc19连接过30kb没问题的。
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4楼2014-12-03 16:44:46
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 克隆大虾 at 2014-12-03 16:44:46
puc19,pbluescript 等都可以。我用puc19连接过30kb没问题的。

pUC19能连接上30K的片段啊，太牛了，请教下细节问题啊。。我用pCAMBIA系列植物表达载体连5Kb的都没连上。。。惭愧。。。。。。
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漫洒英雄泪，相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行？一任俺芒鞋破钵随缘化！
5楼2015-12-13 16:23:02
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