应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » CTAB法提取真菌DNA总是降解，希望大家帮忙分析一下原因
91/1返回列表
查看: 1439  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

1405981468a

新虫 (初入文坛)

[交流] CTAB法提取真菌DNA总是降解，希望大家帮忙分析一下原因 已有4人参与

CTAB法提取真菌DNA总是降解，希望大家帮忙分析一下原因
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-12-01 16:40:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jjf139

金虫 (著名写手)

新药研发&药物分析
商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
严格规范操作，腿勤手快，防止DNA酶的污染和降解，试剂盒是否过期，酶抑制剂活性有无，逐一分析吧。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
2楼2014-12-01 17:58:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1405981468a

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jjf139 at 2014-12-01 17:58:21
严格规范操作，腿勤手快，防止DNA酶的污染和降解，试剂盒是否过期，酶抑制剂活性有无，逐一分析吧。

谢谢，可是我用的是CTAB法提的，已经3个月了，因为DNA效果不好，后面PCR也收到了影响，药品也换了，试剂也重新配制了，加了RNAase和不加RNAase降解都非常严重，还尝试加了蛋白酶k，可还是不行，都有哪些关键步骤容易出现问题呢？
赞一下 回复此楼
3楼2014-12-02 20:30:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhijiangshui

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
会不会每次体的样多，加入液氮研磨后，放置时间长，降解了
赞一下 回复此楼
4楼2014-12-05 12:55:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

油炸花生米

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你是用什么缓冲液保存的样品啊？如果TE保存的不好的话，可以试试Tris-HCl
赞一下 回复此楼
5楼2014-12-05 13:44:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1405981468a

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 油炸花生米 at 2014-12-05 13:44:43
你是用什么缓冲液保存的样品啊？如果TE保存的不好的话，可以试试Tris-HCl

我的实验步骤是这样的
1.菌体培养一夜，长出菌丝，研磨（所有的器具都是预冷的）
2.加入1.5ml的离心管中，加入60℃预热的CTAB，水浴30min，期间轻轻的震荡几次
3,。加入酚氯仿异戊醇25:24:1，混匀（轻柔），4度离心8min
4，吸取上清，加入氯仿异戊醇24:1，混匀，4度离心8min
5.吸取上清，加入异丙醇，离心10min
6.75%的乙醇洗涤
7.30摄氏度干燥1小时
8.40μlRNase溶解，30摄氏度30min
9.电泳
大家看看哪里有错误，希望批评指正
赞一下 回复此楼
6楼2014-12-07 18:58:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

油炸花生米

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 1405981468a at 2014-12-07 18:58:19
我的实验步骤是这样的
1.菌体培养一夜，长出菌丝，研磨（所有的器具都是预冷的）
2.加入1.5ml的离心管中，加入60℃预热的CTAB，水浴30min，期间轻轻的震荡几次
3,。加入酚氯仿异戊醇25:24:1，混匀（轻柔），4度 ...

我没用过CTAB法提过DNA，现在都有现成的试剂盒，何必还用这些化学的东西来提，不过从经验上来讲，有些时候，完全按照SOP也不见得会得到好的效果，具体还要根据自己的实际情况来调整
赞一下 回复此楼
7楼2014-12-08 21:27:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1405981468a

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 油炸花生米 at 2014-12-08 21:27:15
我没用过CTAB法提过DNA，现在都有现成的试剂盒，何必还用这些化学的东西来提，不过从经验上来讲，有些时候，完全按照SOP也不见得会得到好的效果，具体还要根据自己的实际情况来调整...

谢谢啦
回复此楼
8楼2014-12-10 11:00:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

混合配搭

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 1405981468a at 2014-12-07 18:58:19
我的实验步骤是这样的
1.菌体培养一夜，长出菌丝，研磨（所有的器具都是预冷的）
2.加入1.5ml的离心管中，加入60℃预热的CTAB，水浴30min，期间轻轻的震荡几次
3,。加入酚氯仿异戊醇25:24:1，混匀（轻柔），4度 ...

你好，我想问一下，你的菌丝是怎么培养的，用不用先在固体培养基上培养一段时间后，再转到液体培养基上啊？具体培养多长时间啊
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2015-06-30 16:37:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 1405981468a 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +3 5lbyq5wrhb 2026-02-07 3/150 2026-02-08 03:05 by vs90ilomwc
[考博] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +3 5lbyq5wrhb 2026-02-07 3/150 2026-02-08 02:52 by vs90ilomwc
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +3 3rkserf6qr 2026-02-07 4/200 2026-02-08 02:45 by vs90ilomwc
[考博] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +5 2h7du0nuhk 2026-02-07 5/250 2026-02-08 02:25 by vs90ilomwc
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 5/250 2026-02-08 02:12 by vs90ilomwc
[考博] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 6/300 2026-02-08 02:07 by vs90ilomwc
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 6/300 2026-02-08 02:05 by vs90ilomwc
[找工作] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 6/300 2026-02-08 01:46 by vs90ilomwc
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 7/350 2026-02-08 01:45 by vs90ilomwc
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 7/350 2026-02-08 01:26 by vs90ilomwc
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 7/350 2026-02-08 01:12 by vs90ilomwc
[教师之家] 有院领导为了换新车，用横向课题经费买了俩车 +7 瞬息宇宙 2026-02-04 7/350 2026-02-07 21:47 by tfang
[有机交流] 酰胺脱乙酰基 10+5 chibby 2026-02-03 12/600 2026-02-07 19:29 by 江东闲人
[基金申请] 同年申请2项不同项目，第1个项目里不写第2个项目的信息，可以吗 +4 hitsdu 2026-02-06 4/200 2026-02-07 13:07 by jurkat.1640
[基金申请] 有时候真觉得大城市人没有县城人甚至个体户幸福 +9 苏东坡二世 2026-02-04 10/500 2026-02-07 12:37 by 小毛球
[考博] 天津大学招2026.09的博士生，欢迎大家推荐交流（博导是本人） +4 a793625982 2026-02-05 5/250 2026-02-07 10:57 by a793625982
[公派出国] CSC & MSCA 博洛尼亚大学能源材料课题组博士/博士后招生｜MSCA经费充足、排名优 +4 雨念 2026-02-01 6/300 2026-02-06 23:32 by MelissaPon
[基金申请] 面上项目申报 +3 Tide man 2026-02-01 3/150 2026-02-05 22:56 by god_tian
[硕博家园] 博士延得我，科研能力直往上蹿 +7 偏振片 2026-02-02 7/350 2026-02-04 17:36 by 陈氏帝国
[教师之家] 遇见不省心的家人很难过 +18 otani 2026-02-03 22/1100 2026-02-04 11:06 by tangmnt
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭