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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » CTAB法提取真菌DNA总是降解，希望大家帮忙分析一下原因
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1405981468a

新虫 (初入文坛)

[交流] CTAB法提取真菌DNA总是降解，希望大家帮忙分析一下原因 已有4人参与

CTAB法提取真菌DNA总是降解，希望大家帮忙分析一下原因
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1楼 2014-12-01 16:40:20
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jjf139

金虫 (著名写手)

新药研发&药物分析
商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
★
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严格规范操作，腿勤手快，防止DNA酶的污染和降解，试剂盒是否过期，酶抑制剂活性有无，逐一分析吧。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2014-12-01 17:58:21
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1405981468a

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jjf139 at 2014-12-01 17:58:21
严格规范操作，腿勤手快，防止DNA酶的污染和降解，试剂盒是否过期，酶抑制剂活性有无，逐一分析吧。

谢谢，可是我用的是CTAB法提的，已经3个月了，因为DNA效果不好，后面PCR也收到了影响，药品也换了，试剂也重新配制了，加了RNAase和不加RNAase降解都非常严重，还尝试加了蛋白酶k，可还是不行，都有哪些关键步骤容易出现问题呢？
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3楼2014-12-02 20:30:19
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zhijiangshui

新虫 (初入文坛)
★
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会不会每次体的样多，加入液氮研磨后，放置时间长，降解了
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4楼2014-12-05 12:55:47
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油炸花生米

铜虫 (初入文坛)
★
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你是用什么缓冲液保存的样品啊？如果TE保存的不好的话，可以试试Tris-HCl
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5楼2014-12-05 13:44:43
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1405981468a

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 油炸花生米 at 2014-12-05 13:44:43
你是用什么缓冲液保存的样品啊？如果TE保存的不好的话，可以试试Tris-HCl

我的实验步骤是这样的
1.菌体培养一夜，长出菌丝，研磨（所有的器具都是预冷的）
2.加入1.5ml的离心管中，加入60℃预热的CTAB，水浴30min，期间轻轻的震荡几次
3,。加入酚氯仿异戊醇25:24:1，混匀（轻柔），4度离心8min
4，吸取上清，加入氯仿异戊醇24:1，混匀，4度离心8min
5.吸取上清，加入异丙醇，离心10min
6.75%的乙醇洗涤
7.30摄氏度干燥1小时
8.40μlRNase溶解，30摄氏度30min
9.电泳
大家看看哪里有错误，希望批评指正
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6楼2014-12-07 18:58:19
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油炸花生米

铜虫 (初入文坛)
★
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引用回帖:
6楼: Originally posted by 1405981468a at 2014-12-07 18:58:19
我的实验步骤是这样的
1.菌体培养一夜，长出菌丝，研磨（所有的器具都是预冷的）
2.加入1.5ml的离心管中，加入60℃预热的CTAB，水浴30min，期间轻轻的震荡几次
3,。加入酚氯仿异戊醇25:24:1，混匀（轻柔），4度 ...

我没用过CTAB法提过DNA，现在都有现成的试剂盒，何必还用这些化学的东西来提，不过从经验上来讲，有些时候，完全按照SOP也不见得会得到好的效果，具体还要根据自己的实际情况来调整
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7楼2014-12-08 21:27:15
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1405981468a

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 油炸花生米 at 2014-12-08 21:27:15
我没用过CTAB法提过DNA，现在都有现成的试剂盒，何必还用这些化学的东西来提，不过从经验上来讲，有些时候，完全按照SOP也不见得会得到好的效果，具体还要根据自己的实际情况来调整...

谢谢啦
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8楼2014-12-10 11:00:24
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混合配搭

新虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
6楼: Originally posted by 1405981468a at 2014-12-07 18:58:19
我的实验步骤是这样的
1.菌体培养一夜，长出菌丝，研磨（所有的器具都是预冷的）
2.加入1.5ml的离心管中，加入60℃预热的CTAB，水浴30min，期间轻轻的震荡几次
3,。加入酚氯仿异戊醇25:24:1，混匀（轻柔），4度 ...

你好，我想问一下，你的菌丝是怎么培养的，用不用先在固体培养基上培养一段时间后，再转到液体培养基上啊？具体培养多长时间啊
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9楼2015-06-30 16:37:36
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