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1405981468a

新虫 (初入文坛)

[交流] CTAB法提取真菌DNA总是降解,希望大家帮忙分析一下原因 已有4人参与

CTAB法提取真菌DNA总是降解,希望大家帮忙分析一下原因
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油炸花生米

铜虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 1405981468a at 2014-12-07 18:58:19
我的实验步骤是这样的
1.菌体培养一夜,长出菌丝,研磨(所有的器具都是预冷的)
2.加入1.5ml的离心管中,加入60℃预热的CTAB,水浴30min,期间轻轻的震荡几次
3,。加入酚氯仿异戊醇25:24:1,混匀(轻柔),4度 ...

我没用过CTAB法提过DNA,现在都有现成的试剂盒,何必还用这些化学的东西来提,不过从经验上来讲,有些时候,完全按照SOP也不见得会得到好的效果,具体还要根据自己的实际情况来调整
7楼2014-12-08 21:27:15
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jjf139

金虫 (著名写手)

新药研发&药物分析

商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容

小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
严格规范操作,腿勤手快,防止DNA酶的污染和降解,试剂盒是否过期,酶抑制剂活性有无,逐一分析吧。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2014-12-01 17:58:21
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1405981468a

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jjf139 at 2014-12-01 17:58:21
严格规范操作,腿勤手快,防止DNA酶的污染和降解,试剂盒是否过期,酶抑制剂活性有无,逐一分析吧。

谢谢,可是我用的是CTAB法提的,已经3个月了,因为DNA效果不好,后面PCR也收到了影响,药品也换了,试剂也重新配制了,加了RNAase和不加RNAase降解都非常严重,还尝试加了蛋白酶k,可还是不行,都有哪些关键步骤容易出现问题呢?
3楼2014-12-02 20:30:19
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zhijiangshui

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
会不会每次体的样多,加入液氮研磨后,放置时间长,降解了
4楼2014-12-05 12:55:47
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