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luchao507

禁虫 (小有名气)

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ixiaoye2012

金虫 (小有名气)

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luchao507(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-25 13:13:35
Tm42,这种结果也能信?给你个建议做一下降落PCR
就算大雨将整座城市颠倒,我也会给你拥抱
4楼2014-11-25 11:37:09
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航帆

金虫 (初入文坛)

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★ ★ ★ ★ ★
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luchao507: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-11-24 21:20:38
有时候实验是个人品积累的过程……等人品攒够了,或许就出来了

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2楼2014-11-24 21:19:13
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纤纤陌上尘

木虫 (小有名气)

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luchao507(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-26 10:16:09
我之前一直扩不出来,直到后来25ul体系中加了1ulDMSO,屡试不爽

[ 发自小木虫客户端 ]
8楼2014-11-25 16:10:31
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dulei

木虫 (小有名气)

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★ ★ ★
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luchao507: 金币+3 2014-11-25 21:19:50
PCR对于退火温度的依赖性特别小,只要不是过高的Tm值,上下范围差个10度都能P出了,所以梯度PCR对于目标条带影响不大(会有“亮暗”的小区别,不会引起目标条带“有无”的区别)。

你这种情况,模板可能加的过多了,你把模板稀释10-30倍后,再做PCR。同时循环数,加到35-40。
试试。

或者,你既然已经P出来一管,那么就用P出来的PCR产物,作为模板,再进行PCR(也就是二次PCR),肯定有目标产物。
9楼2014-11-25 20:05:40
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普通回帖

fuchange918

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


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luchao507(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-25 13:13:24
换酶试一下,我有一次摸索温度用rTaq酶出了目的条带,在重复就出不来了,换Etaq也没出来,换LA就出了
3楼2014-11-25 07:55:43
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zhaokexue

新虫 (小有名气)

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做梯度PCR,绝对能出来,只要你曾经做出来过

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2014-11-25 13:36:33
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biotech_zhou

木虫 (著名写手)

待人以诚:专业/专注/专心

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和四楼同样的疑问,赞同四楼的说法。
年末优惠荧光定量pcr、WB、ELISA技术服务一律六折!交流锤炼知识,用心构筑桥梁,以更优质的产品及技术服务助力科研;QQ:2513165427;Email:b
6楼2014-11-25 14:54:56
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爱睡猪

金虫 (正式写手)

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42°酶起作用了么
ControlMyself
7楼2014-11-25 15:05:05
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utryer

新虫 (初入文坛)

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cDNA模板不一样了,降解了。
10楼2014-11-25 20:42:32
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