24小时热门版块排行榜    

查看: 3205  |  回复: 25

why025

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

cDNA P了多少次了,早不行了吧
21楼2015-01-07 16:42:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

曼舞流苏

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by dulei at 2014-11-25 20:05:40
PCR对于退火温度的依赖性特别小,只要不是过高的Tm值,上下范围差个10度都能P出了,所以梯度PCR对于目标条带影响不大(会有“亮暗”的小区别,不会引起目标条带“有无”的区别)。

你这种情况,模板可能加的过多 ...

上下10度太多了吧,我上次做的梯度,上下也就差4度,差5度时候就出现了双峰。差更多时候就不只是双峰了,是很多很多的峰。。
22楼2015-01-15 10:59:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dulei

木虫 (小有名气)

引用回帖:
22楼: Originally posted by 曼舞流苏 at 2015-01-15 10:59:25
上下10度太多了吧,我上次做的梯度,上下也就差4度,差5度时候就出现了双峰。差更多时候就不只是双峰了,是很多很多的峰。。...

引物设计要设计好,你要保证引物设计的时候跟上下1000范围内没有计算出来的错配,这样退火温度根本可以不用考虑。我们设计的引物,回来后根本不用管Tm值,随便用45-70度任何一个温度,就都能P出来。当然我们会考虑引物长度的问题,如果引物在20bp左右,那么45-60度都能P出来,如果引物超过30bp,那么55-70度都可以P出来。
所以引物设计的好坏是整个PCR有没有非特异性条带的关键所在。
23楼2015-01-15 16:48:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunshine436

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

估计是你的cda降解了,cda应该分装后保存在负80.每次用都拿新的

[ 发自小木虫客户端 ]
24楼2015-01-16 10:04:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

青柠hsf

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 纤纤陌上尘 at 2014-11-25 16:10:31
我之前一直扩不出来,直到后来25ul体系中加了1ulDMSO,屡试不爽

请教一下前辈,我半年前用同样的事迹P出特别亮的目的条带,现在却经常出现引物二聚体和模板,是否也可以加DMSO?
25楼2015-09-16 22:11:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吕木木

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 纤纤陌上尘 at 2014-11-25 16:10:31
我之前一直扩不出来,直到后来25ul体系中加了1ulDMSO,屡试不爽

DMSO是什么,加多少浓度的啊

发自小木虫Android客户端
26楼2016-04-04 22:16:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 luchao507 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +5 困于星晨 2026-03-17 5/250 2026-03-18 09:39 by zhukairuo
[考研] 285化工学硕求调剂(081700) +9 柴郡猫_ 2026-03-12 9/450 2026-03-17 10:18 by Sammy2
[考研] 278求调剂 +3 Yy7400 2026-03-13 3/150 2026-03-17 08:24 by laoshidan
[考研] 一志愿,福州大学材料专硕339分求调剂 +3 木子momo青争 2026-03-15 3/150 2026-03-17 07:52 by laoshidan
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨; 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
[考研] 286求调剂 +3 lemonzzn 2026-03-16 5/250 2026-03-16 20:43 by lemonzzn
[考研] 化学调剂0703 +8 啊我我的 2026-03-11 8/400 2026-03-16 17:23 by 我的船我的海
[考研] 一志愿985,本科211,0817化学工程与技术319求调剂 +5 Liwangman 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:10 by 我的船我的海
[考研] 321求调剂 +5 大米饭! 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:33 by houyaoxu
[考研] 070300化学学硕求调剂 +6 太想进步了0608 2026-03-16 6/300 2026-03-16 16:13 by kykm678
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
[考研] 327求调剂 +6 拾光任染 2026-03-15 11/550 2026-03-15 22:47 by 拾光任染
[考研] 中科大材料专硕319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-13 3/150 2026-03-14 18:10 by houyaoxu
[考研] 材料080500调剂求收留 +3 一颗meteor 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:54 by peike
[考研] 学硕285求调剂 +13 Wisjxn 2026-03-12 46/2300 2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[考研] 工科,求调剂 +3 我887 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:39 by JourneyLucky
[考研] 314求调剂 +7 无懈可击的巨人 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:40 by JourneyLucky
[考研] 工科调剂 +4 Jiang191123! 2026-03-11 4/200 2026-03-13 15:15 by Miko19
[考研] 化工学硕306求调剂 +9 42838695 2026-03-12 9/450 2026-03-13 10:16 by houyaoxu
[考研] 333求调剂 +3 152697 2026-03-12 4/200 2026-03-13 07:08 by Iveryant
信息提示
请填处理意见