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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR条件不可重复
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luchao507

禁虫 (小有名气)
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1楼 2014-11-24 20:59:14
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dulei

木虫 (小有名气)
引用回帖:
22楼: Originally posted by 曼舞流苏 at 2015-01-15 10:59:25
上下10度太多了吧，我上次做的梯度，上下也就差4度，差5度时候就出现了双峰。差更多时候就不只是双峰了，是很多很多的峰。。...

引物设计要设计好，你要保证引物设计的时候跟上下1000范围内没有计算出来的错配，这样退火温度根本可以不用考虑。我们设计的引物，回来后根本不用管Tm值，随便用45-70度任何一个温度，就都能P出来。当然我们会考虑引物长度的问题，如果引物在20bp左右，那么45-60度都能P出来，如果引物超过30bp，那么55-70度都可以P出来。
所以引物设计的好坏是整个PCR有没有非特异性条带的关键所在。
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23楼2015-01-15 16:48:12
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航帆

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
luchao507: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-11-24 21:20:38
有时候实验是个人品积累的过程……等人品攒够了，或许就出来了

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-11-24 21:19:13
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fuchange918

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
luchao507(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-25 13:13:24
换酶试一下，我有一次摸索温度用rTaq酶出了目的条带，在重复就出不来了，换Etaq也没出来，换LA就出了
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3楼2014-11-25 07:55:43
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ixiaoye2012

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
luchao507(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-25 13:13:35
Tm42，这种结果也能信？给你个建议做一下降落PCR
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就算大雨将整座城市颠倒，我也会给你拥抱
4楼2014-11-25 11:37:09
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