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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR条件不可重复
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luchao507

禁虫 (小有名气)
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1楼2014-11-24 20:59:14
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ixiaoye2012

金虫 (小有名气)

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★
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luchao507(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-25 13:13:35
Tm42，这种结果也能信？给你个建议做一下降落PCR
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就算大雨将整座城市颠倒，我也会给你拥抱
4楼2014-11-25 11:37:09
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航帆

金虫 (初入文坛)

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luchao507: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-11-24 21:20:38
有时候实验是个人品积累的过程……等人品攒够了，或许就出来了

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2楼2014-11-24 21:19:13
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纤纤陌上尘

木虫 (小有名气)

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luchao507(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-26 10:16:09
我之前一直扩不出来，直到后来25ul体系中加了1ulDMSO，屡试不爽

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8楼2014-11-25 16:10:31
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dulei

木虫 (小有名气)

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luchao507: 金币+3 2014-11-25 21:19:50
PCR对于退火温度的依赖性特别小，只要不是过高的Tm值，上下范围差个10度都能P出了，所以梯度PCR对于目标条带影响不大（会有“亮暗”的小区别，不会引起目标条带“有无”的区别）。

你这种情况，模板可能加的过多了，你把模板稀释10-30倍后，再做PCR。同时循环数，加到35-40。
试试。

或者，你既然已经P出来一管，那么就用P出来的PCR产物，作为模板，再进行PCR（也就是二次PCR），肯定有目标产物。
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9楼2014-11-25 20:05:40
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fuchange918

木虫 (正式写手)

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luchao507(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-25 13:13:24
换酶试一下，我有一次摸索温度用rTaq酶出了目的条带，在重复就出不来了，换Etaq也没出来，换LA就出了
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3楼2014-11-25 07:55:43
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zhaokexue

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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做梯度PCR，绝对能出来，只要你曾经做出来过

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5楼2014-11-25 13:36:33
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biotech_zhou

木虫 (著名写手)

待人以诚：专业/专注/专心

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和四楼同样的疑问，赞同四楼的说法。
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6楼2014-11-25 14:54:56
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爱睡猪

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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42°酶起作用了么
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ControlMyself
7楼2014-11-25 15:05:05
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utryer

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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cDNA模板不一样了，降解了。
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10楼2014-11-25 20:42:32
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