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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 3’RACE问题求助
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guaidiandian

新虫 (小有名气)

[交流] 3’RACE问题求助 已有3人参与

3‘RACE用rtaq酶一直做不出来，自己设计引物做的，模板时间放了快一个月，不知道问题出在什么方面，会是模板放时间久加为掉了的问题么？
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1楼 2014-11-19 10:35:53
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青青雨季

新虫 (初入文坛)
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-11-20 12:58:52
race对模板要求还是比较高的，你可以先检测一下你的模板是否可用。
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2楼2014-11-19 16:23:14
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guaidiandian

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 青青雨季 at 2014-11-19 16:23:14
race对模板要求还是比较高的，你可以先检测一下你的模板是否可用。

模板之前有用Acting做PCR，有出现条带~今天把引物的量加大了一倍，有条带出现，但是都是250bp到500bp之间，位置不对，准确的位置应该是900到1000bp左右，又不知道是怎么回事了。
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3楼2014-11-19 21:47:37
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boshi_1981

铁虫 (小有名气)
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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-11-20 12:58:56
当时做3'应该还是比较容易的，最好是用新提取的模版，成功率会增加很多。
并且当时我用的takara的盒，是巢式pcr，外侧引物扩增没有条带，是空模版，然后用外侧引物扩增产物进行内测引物的扩增成功获得目的条带。建议尝试一下。
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没有远方
4楼2014-11-20 09:24:53
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盛夏海棠

木虫 (初入文坛)
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-21 23:23:09
模板反复冻融会降解，可以反转录之后分装了用，否则会影响结果。之前做的时候用放很久的模板做不出来，但是换了新提的RNA反转录的模板就能做出来
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天道酬勤
5楼2014-11-20 16:04:56
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