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蛋白表达 超声破碎问题 已有1人参与
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本人新手，不知道跑SDS-page时的上清和沉淀具体是哪个？ 用（1）（2）（3）（4）中哪2个跑SDS-page？ 超声破碎后用不用离心啊？ 1. 上清：菌体诱导再离心后的上清（1）， 沉淀：菌体离心后沉淀， 再用PBS悬浮，再超声波破碎（2） 2.菌体离心后，PBS重悬，超声波破碎破碎，离心后的上清（3） 和沉淀（4） |
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youlinglyw
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3楼2014-11-19 10:22:12
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95846713(myprayer代发): 金币+5, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-19 11:34:20
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一般情况下 跑1 的目的是为了检测你的蛋白是否除了包涵体外，还有可溶部分表达。如果可溶部分表达多的话，那么说不定有活性或者需要收集。毕竟表达不易。不过大部分原核表达都是包涵体了，因为表达速度快，再加上缺乏必要的酶去折叠修饰 跑2的目的，这个一般是用来和1做对比的。证明你的蛋白是在包涵体表达，而不是上清表达。 以上为一栏。可以并列跑，做对比。 跑3的目的是为了检测你的包涵体在超声破碎后已经重新溶解在pbs中， 跑4的目的是为了检测你的包涵体在超声破碎后，依然没有溶解在pbs中，那么你需要用尿素之类的溶解过夜去把蛋白提取出来。 以上为一栏，可以并列跑，作对比，来防止有的蛋白非常容易溶解，你辛辛苦苦把包涵体拿出来，尿素溶解后，却发现，没东西，人家早就溶解到了上清了（这个比较罕见哈，也不排除，生物嘛，没有例外还叫生物啊） 这4个都是有必要跑的。 其中1,2是必须跑得，用来最初证明包涵体表达。在发文章也会用到，而3,4则是用来做方便实验的。 因为蛋白的种类多，条件也复杂。等电点等稍微的差异都会造成溶解不一样。 如果非说要跑的话，2,4是必须跑，事实上，1,2,4都是常见的。而很多人会选择1,2,3,4都跑胶，这样，证据鲜明，对照明显，有说服力。 |
2楼2014-11-19 10:16:39
4楼2014-11-19 10:27:06
