| 查看: 3343 | 回复: 3 | |||||
[求助]
蛋白表达 超声破碎问题 已有1人参与
|
|
本人新手，不知道跑SDS-page时的上清和沉淀具体是哪个？ 用（1）（2）（3）（4）中哪2个跑SDS-page？ 超声破碎后用不用离心啊？ 1. 上清：菌体诱导再离心后的上清（1）， 沉淀：菌体离心后沉淀， 再用PBS悬浮，再超声波破碎（2） 2.菌体离心后，PBS重悬，超声波破碎破碎，离心后的上清（3） 和沉淀（4） |
回复此楼» 猜你喜欢
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有245人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有3人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 大肠杆菌超声破碎问题，欢迎大神前来探讨
已经有12人回复
- 蛋白表达，大肠杆菌添加IPTG后菌液渐变澄清
已经有18人回复
- 蛋白超声会失活吗？
已经有8人回复
- 细菌超声破碎之后，破碎液中的酶没有活性。
已经有15人回复
- 目的蛋白表达纯化，求教高手
已经有12人回复
- GST纯化问题求助
已经有11人回复
- 进行超声破碎后，怎样确定细胞破碎程度？
已经有6人回复
- 酶切位点的选择对蛋白表达有影响吗
已经有6人回复
- 蛋白破碎后，上清的活性很低
已经有24人回复
- 超声破碎后跑胶有拖尾，是蛋白降解还是？
已经有5人回复
- 高手们！超声波能否破碎大分子蛋白！谁做过相关实验或者有相关资料指导下！非常感谢！
已经有10人回复
- 超声破碎细胞之后 离心转速问题
已经有15人回复
- 请问pET30b这个载体在IPTG诱导后有没有可能表达除了目的蛋白以外的其他蛋白？
已经有16人回复
- 大肠杆菌BL21菌株表达目的蛋白时，菌液破碎前后的浑浊程度变化很不明显
已经有5人回复
- 表达蛋白折叠不正确会有活性麽？
已经有15人回复
- 蛋白诱导不能表达！
已经有21人回复
- 胞内酶不能用超声破碎怎么办？
已经有15人回复
- bl21超声破壁问题
已经有4人回复
- 大肠杆菌超声破碎参数，求解！！！
已经有15人回复
- 超声破碎细胞心得
已经有25人回复
- 急！蛋白截短表达不成功~
已经有8人回复
- 请大家帮忙分析下我的SDS-PAGE蛋白检测胶啊
已经有26人回复
- 蛋白降解的问题
已经有11人回复
- 【转帖】关于细菌超声破碎的一些经验总结
已经有13人回复
- 【求助/交流】关于超声破碎细菌~~~
已经有14人回复
youlinglyw
荣誉版主 (著名写手)
一匡天下
-
专家经验: +37 - MolEPI: 1
- 应助: 136 (高中生)
- 贵宾: 0.077
- 金币: 8060.9
- 散金: 8858
- 红花: 208
- 沙发: 2
- 帖子: 1511
- 在线: 263.8小时
- 虫号: 787036
- 注册: 2009-06-04
- 性别: GG
- 专业: 认知科学
- 管辖: 生物科学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
95846713(myprayer代发): 金币+5, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-19 11:34:20
感谢参与，应助指数 +1
95846713(myprayer代发): 金币+5, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-19 11:34:20
|
一般情况下 跑1 的目的是为了检测你的蛋白是否除了包涵体外，还有可溶部分表达。如果可溶部分表达多的话，那么说不定有活性或者需要收集。毕竟表达不易。不过大部分原核表达都是包涵体了，因为表达速度快，再加上缺乏必要的酶去折叠修饰 跑2的目的，这个一般是用来和1做对比的。证明你的蛋白是在包涵体表达，而不是上清表达。 以上为一栏。可以并列跑，做对比。 跑3的目的是为了检测你的包涵体在超声破碎后已经重新溶解在pbs中， 跑4的目的是为了检测你的包涵体在超声破碎后，依然没有溶解在pbs中，那么你需要用尿素之类的溶解过夜去把蛋白提取出来。 以上为一栏，可以并列跑，作对比，来防止有的蛋白非常容易溶解，你辛辛苦苦把包涵体拿出来，尿素溶解后，却发现，没东西，人家早就溶解到了上清了（这个比较罕见哈，也不排除，生物嘛，没有例外还叫生物啊） 这4个都是有必要跑的。 其中1,2是必须跑得，用来最初证明包涵体表达。在发文章也会用到，而3,4则是用来做方便实验的。 因为蛋白的种类多，条件也复杂。等电点等稍微的差异都会造成溶解不一样。 如果非说要跑的话，2,4是必须跑，事实上，1,2,4都是常见的。而很多人会选择1,2,3,4都跑胶，这样，证据鲜明，对照明显，有说服力。 |
2楼2014-11-19 10:16:39
youlinglyw
荣誉版主 (著名写手)
一匡天下
-
专家经验: +37 - MolEPI: 1
- 应助: 136 (高中生)
- 贵宾: 0.077
- 金币: 8060.9
- 散金: 8858
- 红花: 208
- 沙发: 2
- 帖子: 1511
- 在线: 263.8小时
- 虫号: 787036
- 注册: 2009-06-04
- 性别: GG
- 专业: 认知科学
- 管辖: 生物科学
3楼2014-11-19 10:22:12
4楼2014-11-19 10:27:06
20