应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » GST纯化问题求助
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
121/2返回列表12下一页
查看: 1581  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

小郭tongxue

铁虫 (小有名气)

[求助] GST纯化问题求助 已有3人参与

初次做GST纯化，希望得到各位大虾的指点：）

1、Rosetta表达的pGEX重组质粒，16度过夜诱导；
2、超声破碎细胞，超声功率不到400w，8min（超1s，停2s）；
3、使用1 ml GSTrap FF 预装柱（新柱子但过期半年），严格按照说明书操作：5 ml binding buffer（1ml/min）, 1 ml sample (0.2-1 ml/min), 20 ml binding buffer洗柱子直至无蛋白，5 ml elution buffer洗脱；
4、结果如图1：line1为超声破碎上清、line2为loading穿刺液、line3、4为elution洗脱液（最浓的条带即为目的蛋白）。从结果可以看出，挂柱效果不好，并且杂蛋白也非特异性结合，so改进了纯化方案中的洗柱子buffer；
5、改进方案：：5 ml binding buffer（1ml/min）, 1 ml sample (0.2-1 ml/min), 20 ml wash buffer（添加1%曲拉通，500mM NaCl）洗柱子直至无蛋白，5 ml elution buffer洗脱；
6、改进后结果如图2：line1为细胞破碎上清、line2为穿刺样品、line3为wash样品、line4为纯化样品，未见好转。

可能原因：
1、柱子过期？
2、蛋白超声破碎条件过于剧烈？

还望各位高手帮忙分析其他可能的原因，带金币谢过！
GST纯化问题求助
2.jpg


GST纯化问题求助-1
1.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-11-29 20:56:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

莓林塔

木虫 (小有名气)
★ ★
wizardfan: 金币+2, 谢谢参与 2013-12-01 08:54:35
我随便说一句，400w不算剧烈了吧？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
2楼2013-11-30 16:22:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

莓林塔

木虫 (小有名气)
有没有试试改变下洗涤的pH啥的呢？小柱子同时摸呀，让美女师妹们一人摸俩条件^_^

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
3楼2013-11-30 17:13:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

exon2002

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-12-01 08:54:51
可先做批量纯化，摸好条件后再过柱。洗涤剂不可太多。
赞一下 回复此楼
4楼2013-12-01 06:26:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pixiaoluo

新虫 (初入文坛)
奉命顶贴
回复此楼
5楼2013-12-02 09:19:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

莓林塔

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
要不要流速再慢点？
赞一下 回复此楼
6楼2013-12-02 14:51:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

莓林塔

木虫 (小有名气)
咋样啦
回复此楼
7楼2013-12-05 08:09:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小郭tongxue

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 莓林塔 at 2013-12-05 08:09:43
咋样啦

停滞不前，在做另一个实验，它就休息了
赞一下 回复此楼
8楼2013-12-05 10:21:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

科研屌丝007

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

今天我也遇到了同样的问题，我的也是洗脱液中杂蛋白比较多。我用的是10mM GSH来洗脱的，专家建议在这之前先用低浓度的GSH来洗脱杂蛋白，感觉还蛮有道理的，可以一试。我明天再尝试一下，楼主不妨也试一试。
赞一下 回复此楼
9楼2014-02-13 19:54:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiaolong11a

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我门当时做的时候是增加氯化钠的浓度，并加入1%Trixon-100进行洗涤，效果还是不错的，杂蛋白消失不少
赞一下 回复此楼
多情总被无情扰。。。愁
10楼2014-02-14 09:21:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 小郭tongxue 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂到材料 +3 程9915 2026-04-06 3/150 2026-04-06 14:33 by going home
[考研] 286求调剂 +11 Faune 2026-04-06 11/550 2026-04-06 12:50 by zllcz
[考研] 085600材料与化工301分求调剂院校 +14 刺痛jk 2026-04-06 15/750 2026-04-06 11:57 by lijunpoly
[考研] 0703总分331求调剂 +10 ZY-05 2026-04-04 14/700 2026-04-06 11:51 by xhai2011
[考研] 求调剂，一志愿厦门大学，生物与医药，总分272，本科211 +4 Electron1cc 2026-04-01 5/250 2026-04-06 10:45 by barlinike
[考研] 272分求调剂 +4 wangyile2233 2026-04-02 4/200 2026-04-05 22:21 by 286640313
[考研] 085600，320分求调剂 +7 大馋小子 2026-04-01 8/400 2026-04-05 21:19 by 学员8dgXkO
[考研] 285求调剂 +4 恶法大二的气味� 2026-04-05 5/250 2026-04-05 20:32 by 286640313
[考研] 材料专硕(0856) 339分求调剂 +10 哈哈哈鹅哈哈哈 2026-04-04 10/500 2026-04-05 18:51 by 蓝云思雨
[考研] 328分调剂 +6 门men 2026-04-04 6/300 2026-04-05 13:40 by imissbao
[考研] 数一英一274机械调剂 +5 星陨流霞 2026-04-04 6/300 2026-04-05 11:38 by arrow8852
[考研] 298求调剂 +7 manman511 2026-04-05 7/350 2026-04-05 10:29 by 唐沐儿
[考研] 353求调剂 +10 MayUxw1 2026-04-03 10/500 2026-04-05 09:23 by 无际的草原
[考研] 313求调剂 +3 海日海日 2026-04-04 3/150 2026-04-05 07:48 by 544594351
[考研] 341求调剂 +3 洛多罗 2026-04-02 4/200 2026-04-04 21:36 by 智能智慧
[考研] 材料调剂 +12 一样YWY 2026-04-02 13/650 2026-04-04 20:49 by 蓝云思雨
[考研] 285求调剂 +5 AZMK 2026-04-03 8/400 2026-04-03 18:17 by AZMK
[考研] 282求调剂 +5 呼吸都是减肥 2026-03-31 5/250 2026-04-03 12:03 by 1753564080
[考研] 303求调剂 +3 一色清羽 2026-04-02 4/200 2026-04-03 10:22 by 蓝云思雨
[考研] 296求调剂 +4 sdhu 2026-04-02 4/200 2026-04-02 21:29 by baoball
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭