应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】Thrombin protease切GST问题
51/1返回列表
查看: 2324  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

yzfjfx1986

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】Thrombin protease切GST问题

我目的蛋白-GST为36分子量，目的蛋白10kDa左右，GST26kDa，用10u 20u 40u 去切GST，我前面用10u切了15小时，切不出目的蛋白，用GSH去还原胶，跑SDS-PAGE,果然还在胶上，应该说明没切下来，因此我用20u 40u去切20个小时（前面短时间2h，3h也切过，效果一样不好），这次有些短的条带出来了，但仍找不见目的条带，因此想问下用几U和多少时间去切是最佳的，希望哪位高手可答复下，急啊
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-03-04 20:19:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★ ★
yzfjfx1986(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+1): 感谢交流 2011-03-06 15:01:06
试过换温度么？我们有的时候4度切不掉就20度或者37度切。不知道你用的酶和我们用的一样不。 我们的用量一般是按体积来算的， 1-2U/ml。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-03-04 21:11:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yzfjfx1986

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-03-04 21:11:24:
试过换温度么？我们有的时候4度切不掉就20度或者37度切。不知道你用的酶和我们用的一样不。 我们的用量一般是按体积来算的， 1-2U/ml。

我凝血酶来自牛血清，要求20-22度，也在这个温度下切了，4度没试过，根据说明书应该是不可以的，酶活会很低，反正切了收集的上清中没找到要的目的条带，我继续用GSH去还原剩下的含GST或GST-杂蛋白的胶（中间用PBS洗下），结果提下来的居然在10左右出现了一个条带，让我感到非常奇怪，我要的那个条带居然在Thrombin后留在了胶了，而且这个蛋白不可能是与GST结合的（远远低于26kDa），它怎么会留在胶上？？
赞一下 回复此楼
3楼2011-03-06 12:08:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
引用回帖:
Originally posted by yzfjfx1986 at 2011-03-06 12:08:39:
我凝血酶来自牛血清，要求20-22度，也在这个温度下切了，4度没试过，根据说明书应该是不可以的，酶活会很低，反正切了收集的上清中没找到要的目的条带，我继续用GSH去还原剩下的含GST或GST-杂蛋白的胶（中间用P ...

好诡异啊。。。
回复此楼
4楼2011-03-06 12:14:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

郜珊

新虫 (初入文坛)
★
yzfjfx1986(金币+1): 谢谢参与
你好好查一下，你的目的蛋白的序列中是否有凝血酶酶切位点，如果有的话，可能凝血酶把目的条带切下来一部分。
赞一下 回复此楼
5楼2013-01-23 12:52:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yzfjfx1986 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭