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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 超声破碎细胞心得
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fanger

银虫 (小有名气)

[交流] 超声破碎细胞心得

此前用超声波细胞粉碎机粉碎细胞，感觉没有效果！操作没有问题，而另外问师兄师姐他们破碎得了，实在很费解，但我必须用这种方法破碎，这样对酶活的影响最小，所以请来了仪器厂家的技术员，这一来果然发现了问题！本身超声波粉碎细胞的效果很好，师兄师姐他们的破碎得了只是破了一点点，结果是因为变幅杆的问题！变幅杆得用扳手拧紧，手动拧不紧，相当于空载，不但破碎效果不好，还容易坏仪器！[/b]这对我的后续实验是一个很大帮助！借此和大家分享一下！破碎1.5，5mL的用6mm的变幅杆就可以了！几十mL的得用大的变幅杆，这样效果好些！而且大的变幅杆功率要求功率更大！槽温度不宜过低！看你的探针是加在哪里的，如果是大的管子，比如50mL的。你可以插在管子里，测的是你破碎液的温度，所以温度不能设得过高，30度左右。万一温度升至你设的温度，变幅杆会停止工作！要想破碎效果好又不影响酶活，那就减小间隙开的时间，增大间隙停的时间！让温度能维持较低。小的EP管，根本就是不能插的，探针是置于空气中的，但仍不能太低哟！偏高比较好！因为室温不那么低的！
希望这篇文章能给纠结着用超声波破碎细胞的人一个实际的帮助！另外，欢迎大家交流探讨实验问题！
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1楼 2011-11-23 15:15:57
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547star

木虫 (著名写手)
★
fanger(金币+1):谢谢参与
我用2mm的变幅杆，插EP管没问题。我从来不用温度探头，先冰浴一阵子样品，然后把EP管放在冰水浴中破胞。
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5楼2011-11-23 18:35:31
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乘风浮云

新虫 (正式写手)
★
fanger(金币+1):谢谢参与
最近也在用超声破碎细胞，注意的地方真多，弄不好就测不出酶活。。。
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4楼2011-11-23 17:34:56
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fldzm04

金虫 (小有名气)
★
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顶一下，我曾经就纠结在超声破碎这一步，菌液怎么都破碎不了，打两下菌液就成乳白色，后来实验就放弃了，可惜了。
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7楼2011-11-24 09:02:47
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wanghuiyanyx

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
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顶，很感谢交流实验心得
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8楼2011-11-24 15:30:43
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chhuaao

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
送鲜花一朵
楼主做事挺细心的
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10楼2011-12-11 09:19:09
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daiguoying

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
送鲜花一朵
楼主分享的好，谢谢~
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11楼2012-03-09 21:57:09
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胡小喜

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
想问下楼主破碎真菌细胞壁一般用多大功率，超声多长时间呢？希望大侠指点啊
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12楼2012-11-21 15:49:43
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qianshengguo

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我一般150ml用20的摇杆，破碎探头不能插入液面太深，太深的话破碎效果很差。而50ml的话，就要降低功率，增加间隙时间，否则很容易导致失活。
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13楼2012-11-22 10:31:46
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czcpudai

铜虫 (正式写手)
★
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试问一下楼主，您这是破的贴壁培养的细胞吗？
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14楼2013-06-25 22:21:00
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fanger

银虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by czcpudai at 2013-06-25 22:21:00
试问一下楼主，您这是破的贴壁培养的细胞吗？

是的
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15楼2013-06-26 09:57:38
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树袋熊欧尼

银虫 (小有名气)
★
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探头一般都放液面一下1/2吗？超声细胞悬液的体积有要求吗？对细胞浓度有要求吗？浓度太低是不是破碎不了？刚接触超声破碎细胞，请各位大神指点！

[ Last edited by 树袋熊欧尼 on 2013-11-20 at 15:52 ]
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16楼2013-11-20 15:50:49
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fanger

银虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 树袋熊欧尼 at 2013-11-20 15:50:49
探头一般都放液面一下1/2吗？超声细胞悬液的体积有要求吗？对细胞浓度有要求吗？浓度太低是不是破碎不了？刚接触超声破碎细胞，请各位大神指点！

液面以下1cm左右即可，浓度太低你破碎了也没用啊。一般不会啊 ，破碎细胞提蛋白的话要一瓶细胞加1mLPBS，这样蛋白浓度比较好，只要有0.1g/L以上的浓度就可以用了，越接近1当然越好了，超声波破碎肯定还是有一部分没有破碎好的。
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17楼2013-11-20 16:48:25
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fanger

银虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by czcpudai at 2013-06-25 22:21:00
试问一下楼主，您这是破的贴壁培养的细胞吗？

是的啊，贴壁培养的细胞消 化后用PBS重悬了的
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18楼2013-11-20 16:49:12
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1040768794

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这个温度，时间，频率什么的，都需要设置的，怎么才能寻找到一个最优条件是个问题啊
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19楼2013-11-21 08:59:43
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西门伊馨

新虫 (初入文坛)
★
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楼主你好，
以前没做过细胞破碎，想请教您一下，我是做293T细胞的，想用这个细胞做IP实验，那么怎么破碎细胞呢？破碎的时候是加PBS还是裂解液，破碎频率应该多少？
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20楼2014-06-18 09:58:13
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四两

银虫 (初入文坛)
★
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引用回帖:
20楼: Originally posted by 西门伊馨 at 2014-06-18 09:58:13
楼主你好，
以前没做过细胞破碎，想请教您一下，我是做293T细胞的，想用这个细胞做IP实验，那么怎么破碎细胞呢？破碎的时候是加PBS还是裂解液，破碎频率应该多少？

我跟你同样的问题，请问你解决了吗？
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21楼2014-06-24 18:21:25
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树袋熊欧尼

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
17楼: Originally posted by fanger at 2013-11-20 16:48:25
液面以下1cm左右即可，浓度太低你破碎了也没用啊。一般不会啊 ，破碎细胞提蛋白的话要一瓶细胞加1mLPBS，这样蛋白浓度比较好，只要有0.1g/L以上的浓度就可以用了，越接近1当然越好了，超声波破碎肯定还是有一部分没 ...

您好，主要是我的一个样品细胞大概100000个细胞，所以加的PBS太少，没办法超声，加的太多，细胞密度太小，对细胞的破碎效果会不会有影响？
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22楼2014-06-28 19:00:35
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caizeyuan922

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
22楼: Originally posted by 树袋熊欧尼 at 2014-06-28 19:00:35
您好，主要是我的一个样品细胞大概100000个细胞，所以加的PBS太少，没办法超声，加的太多，细胞密度太小，对细胞的破碎效果会不会有影响？...

同问啊
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23楼2014-08-13 09:53:48
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chengzi260

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你好，我也在使用超声波细胞粉碎机，想请教一个问题，麻烦帮我分析一下，可以吗
我做的是超声降解环丙沙星，氧化剂是双氧水，前后同样的操作条件，现在环丙沙星的降解率完全不一致，好长时间了也没找到原因
首先我的双氧水是没问题的，操作前后完全一样，
麻烦了，谢谢，不胜感激，我也比较着急
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24楼2015-01-17 11:25:45
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浮生·若梦

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
21楼: Originally posted by 四两 at 2014-06-24 18:21:25
我跟你同样的问题，请问你解决了吗？...

同求，请问你解决了么？
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25楼2015-12-07 19:20:37
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卢静一

新虫 (初入文坛)
★
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你好我现在在用超声细胞粉碎机制备微球，想得到20um左右的球，应该吧功率设到多少啊？容量1.5ml。我用6cm变幅杆稍大功率怎么微球历经反而变大了呢？团聚的厉害
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26楼2017-12-21 00:37:27
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jjxcz2楼
2011-11-23 16:35   回复  
fanger(金币+1):谢谢参与
zlu5203楼
2011-11-23 16:49   回复  
fanger(金币+1):谢谢参与
awenrou6楼
2011-11-23 19:34   回复  
fanger(金币+1):谢谢参与
gsli19879楼
2011-11-25 15:13   回复  
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