应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 超声破碎细胞心得
261/1返回列表
查看: 12544  |  回复: 25
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

fanger

银虫 (小有名气)

[交流] 超声破碎细胞心得

此前用超声波细胞粉碎机粉碎细胞，感觉没有效果！操作没有问题，而另外问师兄师姐他们破碎得了，实在很费解，但我必须用这种方法破碎，这样对酶活的影响最小，所以请来了仪器厂家的技术员，这一来果然发现了问题！本身超声波粉碎细胞的效果很好，师兄师姐他们的破碎得了只是破了一点点，结果是因为变幅杆的问题！变幅杆得用扳手拧紧，手动拧不紧，相当于空载，不但破碎效果不好，还容易坏仪器！[/b]这对我的后续实验是一个很大帮助！借此和大家分享一下！破碎1.5，5mL的用6mm的变幅杆就可以了！几十mL的得用大的变幅杆，这样效果好些！而且大的变幅杆功率要求功率更大！槽温度不宜过低！看你的探针是加在哪里的，如果是大的管子，比如50mL的。你可以插在管子里，测的是你破碎液的温度，所以温度不能设得过高，30度左右。万一温度升至你设的温度，变幅杆会停止工作！要想破碎效果好又不影响酶活，那就减小间隙开的时间，增大间隙停的时间！让温度能维持较低。小的EP管，根本就是不能插的，探针是置于空气中的，但仍不能太低哟！偏高比较好！因为室温不那么低的！
希望这篇文章能给纠结着用超声波破碎细胞的人一个实际的帮助！另外，欢迎大家交流探讨实验问题！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

超声破碎

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

wanghuiyanyx chhuaao daiguoying 树袋熊欧尼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-11-23 15:15:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

547star

木虫 (著名写手)
★
fanger(金币+1):谢谢参与
我用2mm的变幅杆，插EP管没问题。我从来不用温度探头，先冰浴一阵子样品，然后把EP管放在冰水浴中破胞。
赞一下(3人) 回复此楼
5楼2011-11-23 18:35:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

乘风浮云

新虫 (正式写手)
★
fanger(金币+1):谢谢参与
最近也在用超声破碎细胞，注意的地方真多，弄不好就测不出酶活。。。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-11-23 17:34:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fldzm04

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
顶一下，我曾经就纠结在超声破碎这一步，菌液怎么都破碎不了，打两下菌液就成乳白色，后来实验就放弃了，可惜了。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2011-11-24 09:02:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wanghuiyanyx

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
送鲜花一朵
顶，很感谢交流实验心得
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2011-11-24 15:30:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chhuaao

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
送鲜花一朵
楼主做事挺细心的
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2011-12-11 09:19:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

daiguoying

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
送鲜花一朵
楼主分享的好，谢谢~
赞一下 回复此楼
11楼2012-03-09 21:57:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡小喜

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
想问下楼主破碎真菌细胞壁一般用多大功率，超声多长时间呢？希望大侠指点啊
赞一下 回复此楼
12楼2012-11-21 15:49:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qianshengguo

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我一般150ml用20的摇杆，破碎探头不能插入液面太深，太深的话破碎效果很差。而50ml的话，就要降低功率，增加间隙时间，否则很容易导致失活。
赞一下 回复此楼
13楼2012-11-22 10:31:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

czcpudai

铜虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
试问一下楼主，您这是破的贴壁培养的细胞吗？
赞一下 回复此楼
14楼2013-06-25 22:21:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fanger

银虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by czcpudai at 2013-06-25 22:21:00
试问一下楼主，您这是破的贴壁培养的细胞吗？

是的
回复此楼
15楼2013-06-26 09:57:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

树袋熊欧尼

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
送红花一朵
探头一般都放液面一下1/2吗？超声细胞悬液的体积有要求吗？对细胞浓度有要求吗？浓度太低是不是破碎不了？刚接触超声破碎细胞，请各位大神指点！

[ Last edited by 树袋熊欧尼 on 2013-11-20 at 15:52 ]
赞一下 回复此楼
16楼2013-11-20 15:50:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fanger

银虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 树袋熊欧尼 at 2013-11-20 15:50:49
探头一般都放液面一下1/2吗？超声细胞悬液的体积有要求吗？对细胞浓度有要求吗？浓度太低是不是破碎不了？刚接触超声破碎细胞，请各位大神指点！

液面以下1cm左右即可，浓度太低你破碎了也没用啊。一般不会啊 ，破碎细胞提蛋白的话要一瓶细胞加1mLPBS，这样蛋白浓度比较好，只要有0.1g/L以上的浓度就可以用了，越接近1当然越好了，超声波破碎肯定还是有一部分没有破碎好的。
赞一下 回复此楼
17楼2013-11-20 16:48:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fanger

银虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by czcpudai at 2013-06-25 22:21:00
试问一下楼主，您这是破的贴壁培养的细胞吗？

是的啊，贴壁培养的细胞消 化后用PBS重悬了的
赞一下 回复此楼
18楼2013-11-20 16:49:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1040768794

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这个温度，时间，频率什么的，都需要设置的，怎么才能寻找到一个最优条件是个问题啊
赞一下 回复此楼
19楼2013-11-21 08:59:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西门伊馨

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主你好，
以前没做过细胞破碎，想请教您一下，我是做293T细胞的，想用这个细胞做IP实验，那么怎么破碎细胞呢？破碎的时候是加PBS还是裂解液，破碎频率应该多少？
赞一下 回复此楼
20楼2014-06-18 09:58:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

四两

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
20楼: Originally posted by 西门伊馨 at 2014-06-18 09:58:13
楼主你好，
以前没做过细胞破碎，想请教您一下，我是做293T细胞的，想用这个细胞做IP实验，那么怎么破碎细胞呢？破碎的时候是加PBS还是裂解液，破碎频率应该多少？

我跟你同样的问题，请问你解决了吗？
赞一下 回复此楼
21楼2014-06-24 18:21:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

树袋熊欧尼

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
17楼: Originally posted by fanger at 2013-11-20 16:48:25
液面以下1cm左右即可，浓度太低你破碎了也没用啊。一般不会啊 ，破碎细胞提蛋白的话要一瓶细胞加1mLPBS，这样蛋白浓度比较好，只要有0.1g/L以上的浓度就可以用了，越接近1当然越好了，超声波破碎肯定还是有一部分没 ...

您好，主要是我的一个样品细胞大概100000个细胞，所以加的PBS太少，没办法超声，加的太多，细胞密度太小，对细胞的破碎效果会不会有影响？
赞一下 回复此楼
22楼2014-06-28 19:00:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caizeyuan922

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
22楼: Originally posted by 树袋熊欧尼 at 2014-06-28 19:00:35
您好，主要是我的一个样品细胞大概100000个细胞，所以加的PBS太少，没办法超声，加的太多，细胞密度太小，对细胞的破碎效果会不会有影响？...

同问啊
回复此楼
23楼2014-08-13 09:53:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chengzi260

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你好，我也在使用超声波细胞粉碎机，想请教一个问题，麻烦帮我分析一下，可以吗
我做的是超声降解环丙沙星，氧化剂是双氧水，前后同样的操作条件，现在环丙沙星的降解率完全不一致，好长时间了也没找到原因
首先我的双氧水是没问题的，操作前后完全一样，
麻烦了，谢谢，不胜感激，我也比较着急
赞一下 回复此楼
24楼2015-01-17 11:25:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

浮生·若梦

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
21楼: Originally posted by 四两 at 2014-06-24 18:21:25
我跟你同样的问题，请问你解决了吗？...

同求，请问你解决了么？
赞一下 回复此楼
25楼2015-12-07 19:20:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

卢静一

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你好我现在在用超声细胞粉碎机制备微球，想得到20um左右的球，应该吧功率设到多少啊？容量1.5ml。我用6cm变幅杆稍大功率怎么微球历经反而变大了呢？团聚的厉害
赞一下 回复此楼
26楼2017-12-21 00:37:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
jjxcz2楼
2011-11-23 16:35   回复  
fanger(金币+1):谢谢参与
zlu5203楼
2011-11-23 16:49   回复  
fanger(金币+1):谢谢参与
awenrou6楼
2011-11-23 19:34   回复  
fanger(金币+1):谢谢参与
gsli19879楼
2011-11-25 15:13   回复  
谢谢分享
相关版块跳转 我要订阅楼主 fanger 的主题更新
261/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +8 yaoyewhu2008 2026-08-20 8/400 2026-08-20 08:46 by since—2010
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +55 医学老男孩 2026-08-13 123/6150 2026-08-19 23:44 by stan_et
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +12 基诺咪客 2026-08-17 16/800 2026-08-19 22:04 by kk 的小木虫
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖？ +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +10 yuleib84 2026-08-18 11/550 2026-08-19 07:30 by 羽毛枫f
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭