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fanger

银虫 (小有名气)


[交流] 超声破碎细胞心得

此前用超声波细胞粉碎机粉碎细胞,感觉没有效果!操作没有问题,而另外问师兄师姐他们破碎得了,实在很费解,但我必须用这种方法破碎,这样对酶活的影响最小,所以请来了仪器厂家的技术员,这一来果然发现了问题!本身超声波粉碎细胞的效果很好,师兄师姐他们的破碎得了只是破了一点点,结果是因为变幅杆的问题!变幅杆得用扳手拧紧,手动拧不紧,相当于空载,不但破碎效果不好,还容易坏仪器![/b]这对我的后续实验是一个很大帮助!借此和大家分享一下!破碎1.5,5mL的用6mm的变幅杆就可以了!几十mL的得用大的变幅杆,这样效果好些!而且大的变幅杆功率要求功率更大!槽温度不宜过低!看你的探针是加在哪里的,如果是大的管子,比如50mL的。你可以插在管子里,测的是你破碎液的温度,所以温度不能设得过高,30度左右。万一温度升至你设的温度,变幅杆会停止工作!要想破碎效果好又不影响酶活,那就减小间隙开的时间,增大间隙停的时间!让温度能维持较低。小的EP管,根本就是不能插的,探针是置于空气中的,但仍不能太低哟!偏高比较好!因为室温不那么低的!
希望这篇文章能给纠结着用超声波破碎细胞的人一个实际的帮助!另外,欢迎大家交流探讨实验问题!
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树袋熊欧尼

银虫 (小有名气)


★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
17楼: Originally posted by fanger at 2013-11-20 16:48:25
液面以下1cm左右即可,浓度太低你破碎了也没用啊。一般不会啊 ,破碎细胞提蛋白的话要一瓶细胞加1mLPBS,这样蛋白浓度比较好,只要有0.1g/L以上的浓度就可以用了,越接近1当然越好了,超声波破碎肯定还是有一部分没 ...

您好,主要是我的一个样品细胞大概100000个细胞,所以加的PBS太少,没办法超声,加的太多,细胞密度太小,对细胞的破碎效果会不会有影响?
22楼2014-06-28 19:00:35
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查看全部 26 个回答

乘风浮云

新虫 (正式写手)


★
fanger(金币+1):谢谢参与
最近也在用超声破碎细胞,注意的地方真多,弄不好就测不出酶活。。。
4楼2011-11-23 17:34:56
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547star

木虫 (著名写手)


★
fanger(金币+1):谢谢参与
我用2mm的变幅杆,插EP管没问题。我从来不用温度探头,先冰浴一阵子样品,然后把EP管放在冰水浴中破胞。
5楼2011-11-23 18:35:31
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fldzm04

金虫 (小有名气)


★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
顶一下,我曾经就纠结在超声破碎这一步,菌液怎么都破碎不了,打两下菌液就成乳白色,后来实验就放弃了,可惜了。
7楼2011-11-24 09:02:47
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简单回复
jjxcz2楼
2011-11-23 16:35   回复  
fanger(金币+1):谢谢参与
zlu5203楼
2011-11-23 16:49   回复  
fanger(金币+1):谢谢参与
awenrou6楼
2011-11-23 19:34   回复  
fanger(金币+1):谢谢参与
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