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fanger

银虫 (小有名气)

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[交流] 超声破碎细胞心得

此前用超声波细胞粉碎机粉碎细胞，感觉没有效果！操作没有问题，而另外问师兄师姐他们破碎得了，实在很费解，但我必须用这种方法破碎，这样对酶活的影响最小，所以请来了仪器厂家的技术员，这一来果然发现了问题！本身超声波粉碎细胞的效果很好，师兄师姐他们的破碎得了只是破了一点点，结果是因为变幅杆的问题！变幅杆得用扳手拧紧，手动拧不紧，相当于空载，不但破碎效果不好，还容易坏仪器！[/b]这对我的后续实验是一个很大帮助！借此和大家分享一下！破碎1.5，5mL的用6mm的变幅杆就可以了！几十mL的得用大的变幅杆，这样效果好些！而且大的变幅杆功率要求功率更大！槽温度不宜过低！看你的探针是加在哪里的，如果是大的管子，比如50mL的。你可以插在管子里，测的是你破碎液的温度，所以温度不能设得过高，30度左右。万一温度升至你设的温度，变幅杆会停止工作！要想破碎效果好又不影响酶活，那就减小间隙开的时间，增大间隙停的时间！让温度能维持较低。小的EP管，根本就是不能插的，探针是置于空气中的，但仍不能太低哟！偏高比较好！因为室温不那么低的！
希望这篇文章能给纠结着用超声波破碎细胞的人一个实际的帮助！另外，欢迎大家交流探讨实验问题！

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树袋熊欧尼

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1楼 2011-11-23 15:15:57

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树袋熊欧尼

银虫 (小有名气)

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★
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引用回帖:

17楼: Originally posted by fanger at 2013-11-20 16:48:25
液面以下1cm左右即可，浓度太低你破碎了也没用啊。一般不会啊，破碎细胞提蛋白的话要一瓶细胞加1mLPBS，这样蛋白浓度比较好，只要有0.1g/L以上的浓度就可以用了，越接近1当然越好了，超声波破碎肯定还是有一部分没 ...

您好，主要是我的一个样品细胞大概100000个细胞，所以加的PBS太少，没办法超声，加的太多，细胞密度太小，对细胞的破碎效果会不会有影响？