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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 超声破碎细胞心得
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fanger

银虫 (小有名气)

[交流] 超声破碎细胞心得

此前用超声波细胞粉碎机粉碎细胞，感觉没有效果！操作没有问题，而另外问师兄师姐他们破碎得了，实在很费解，但我必须用这种方法破碎，这样对酶活的影响最小，所以请来了仪器厂家的技术员，这一来果然发现了问题！本身超声波粉碎细胞的效果很好，师兄师姐他们的破碎得了只是破了一点点，结果是因为变幅杆的问题！变幅杆得用扳手拧紧，手动拧不紧，相当于空载，不但破碎效果不好，还容易坏仪器！[/b]这对我的后续实验是一个很大帮助！借此和大家分享一下！破碎1.5，5mL的用6mm的变幅杆就可以了！几十mL的得用大的变幅杆，这样效果好些！而且大的变幅杆功率要求功率更大！槽温度不宜过低！看你的探针是加在哪里的，如果是大的管子，比如50mL的。你可以插在管子里，测的是你破碎液的温度，所以温度不能设得过高，30度左右。万一温度升至你设的温度，变幅杆会停止工作！要想破碎效果好又不影响酶活，那就减小间隙开的时间，增大间隙停的时间！让温度能维持较低。小的EP管，根本就是不能插的，探针是置于空气中的，但仍不能太低哟！偏高比较好！因为室温不那么低的！
希望这篇文章能给纠结着用超声波破碎细胞的人一个实际的帮助！另外，欢迎大家交流探讨实验问题！
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wanghuiyanyx chhuaao daiguoying 树袋熊欧尼

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1楼 2011-11-23 15:15:57
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fanger

银虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 树袋熊欧尼 at 2013-11-20 15:50:49
探头一般都放液面一下1/2吗？超声细胞悬液的体积有要求吗？对细胞浓度有要求吗？浓度太低是不是破碎不了？刚接触超声破碎细胞，请各位大神指点！

液面以下1cm左右即可，浓度太低你破碎了也没用啊。一般不会啊 ，破碎细胞提蛋白的话要一瓶细胞加1mLPBS，这样蛋白浓度比较好，只要有0.1g/L以上的浓度就可以用了，越接近1当然越好了，超声波破碎肯定还是有一部分没有破碎好的。
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17楼2013-11-20 16:48:25
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乘风浮云

新虫 (正式写手)
★
fanger(金币+1):谢谢参与
最近也在用超声破碎细胞，注意的地方真多，弄不好就测不出酶活。。。
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4楼2011-11-23 17:34:56
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547star

木虫 (著名写手)
★
fanger(金币+1):谢谢参与
我用2mm的变幅杆，插EP管没问题。我从来不用温度探头，先冰浴一阵子样品，然后把EP管放在冰水浴中破胞。
赞一下(3人) 回复此楼
5楼2011-11-23 18:35:31
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fldzm04

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
顶一下，我曾经就纠结在超声破碎这一步，菌液怎么都破碎不了，打两下菌液就成乳白色，后来实验就放弃了，可惜了。
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7楼2011-11-24 09:02:47
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jjxcz2楼
2011-11-23 16:35   回复  
fanger(金币+1):谢谢参与
zlu5203楼
2011-11-23 16:49   回复  
fanger(金币+1):谢谢参与
awenrou6楼
2011-11-23 19:34   回复  
fanger(金币+1):谢谢参与
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