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zcqh27木虫 (正式写手)
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[交流]
关于IPTG诱导蛋白表达的几个问题
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1，当培养条件中有葡萄糖时，IPTG是否可以诱导目的蛋白表达？会不会存在葡萄糖效应？ 2，被IPTG诱导的菌体是否可以在继续分裂繁殖，如果可以，那么繁殖的下一代是可以直接表达目的蛋白，还是需要额外的一分子IPTG诱导后才能表达。 3，IPTG结合阻遏蛋白，使蛋白构像发生改变，所以才能诱导目的蛋白表达，那么IPTG使阻遏蛋白构象变化后，是一直结合在阻遏蛋白上，还是脱落下来再去结合别的阻遏蛋白？ [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
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zcqh27: 金币+10 2014-11-17 22:02:29
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zcqh27: 金币+10 2014-11-17 22:02:29
我的简单理解，希望对楼主有帮助，不正之处请大家指教。 1.培养基中有葡萄糖，IPTG还是能诱导葡萄糖表达的，很多培养基里都含葡萄糖的。至于会不会有葡萄糖效应，就比较复杂，细菌内cAMP浓度应该受多种因素影响，即使有葡萄糖效应，也只是表达效率不够高吧。 2.IPTG诱导后细菌高表达目标蛋白，增殖会被抑制，但仍然可以增殖。增殖后的细菌当然也需要IPTG分子进入，结合阻遏蛋白，才能表达目标蛋白。 3.阻遏蛋白和IPTG结合后，不能结合在启动子区，目标蛋白可以表达。如果IPTG脱落，阻遏蛋白就可以重新结合DNA,阻遏蛋白表达。原则上分子间相互作用是动态的，IPTG与阻遏蛋白的结合解离也应该是动态的。虽然没查过，IPTG应该是结合阻遏蛋白容易，解离难吧，当然如果该阻遏蛋白老化被降解，IPTG一定是被释放，再结合其它阻遏蛋白。 |
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