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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 关于IPTG诱导蛋白表达的几个问题
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zcqh27

木虫 (正式写手)

[交流] 关于IPTG诱导蛋白表达的几个问题

1，当培养条件中有葡萄糖时，IPTG是否可以诱导目的蛋白表达？会不会存在葡萄糖效应？
2，被IPTG诱导的菌体是否可以在继续分裂繁殖，如果可以，那么繁殖的下一代是可以直接表达目的蛋白，还是需要额外的一分子IPTG诱导后才能表达。
3，IPTG结合阻遏蛋白，使蛋白构像发生改变，所以才能诱导目的蛋白表达，那么IPTG使阻遏蛋白构象变化后，是一直结合在阻遏蛋白上，还是脱落下来再去结合别的阻遏蛋白？

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1楼2014-11-16 08:17:30
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guoliwang

至尊木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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zcqh27: 金币+10 2014-11-17 22:02:29
我的简单理解，希望对楼主有帮助，不正之处请大家指教。
1.培养基中有葡萄糖，IPTG还是能诱导葡萄糖表达的，很多培养基里都含葡萄糖的。至于会不会有葡萄糖效应，就比较复杂，细菌内cAMP浓度应该受多种因素影响，即使有葡萄糖效应，也只是表达效率不够高吧。
2.IPTG诱导后细菌高表达目标蛋白，增殖会被抑制，但仍然可以增殖。增殖后的细菌当然也需要IPTG分子进入，结合阻遏蛋白，才能表达目标蛋白。
3.阻遏蛋白和IPTG结合后，不能结合在启动子区，目标蛋白可以表达。如果IPTG脱落，阻遏蛋白就可以重新结合DNA,阻遏蛋白表达。原则上分子间相互作用是动态的，IPTG与阻遏蛋白的结合解离也应该是动态的。虽然没查过，IPTG应该是结合阻遏蛋白容易，解离难吧，当然如果该阻遏蛋白老化被降解，IPTG一定是被释放，再结合其它阻遏蛋白。
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zcqh27
慎思明辨博学笃行
3楼2014-11-16 10:25:14
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查看全部 8 个回答

阿Q~~

至尊木虫 (文坛精英)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
帮顶一下，不懂~~~~~~~~~~~~~
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自强不息，厚德载物；独立精神，自由思想。
2楼2014-11-16 09:01:13
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zcqh27

木虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by guoliwang at 2014-11-16 10:25:14
我的简单理解，希望对楼主有帮助，不正之处请大家指教。
1.培养基中有葡萄糖，IPTG还是能诱导葡萄糖表达的，很多培养基里都含葡萄糖的。至于会不会有葡萄糖效应，就比较复杂，细菌内cAMP浓度应该受多种因素影响， ...

1，也就是说，在诱导期间，菌体密度会一直增加，所以还需要一直补充IPTG，用于诱导那些新繁殖出来的菌体。
2，在摇瓶中，初始诱导菌体密度是0.6，加0.1mM的IPTG诱导，诱导结束时，OD值在5左右。那也就是说，一开始加入的0.1的IPTG就是过量的，多余的IPTG用于诱导新增殖的菌体。
3，如果是在发酵罐里，通过补料菌体密度会更高，也就是需要加入更多的IPTG，需要更长的诱导时间了。
4，能详细介绍一下葡萄糖对IPTG诱导的影响吗。

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4楼2014-11-17 22:15:32
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guoliwang

至尊木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by zcqh27 at 2014-11-17 22:15:32
1，也就是说，在诱导期间，菌体密度会一直增加，所以还需要一直补充IPTG，用于诱导那些新繁殖出来的菌体。
2，在摇瓶中，初始诱导菌体密度是0.6，加0.1mM的IPTG诱导，诱导结束时，OD值在5左右。那也就是说，一开始 ...

对，应该加足量的IPCG。有人会通过预实验比较不同IPCG浓度的蛋白表达量，找到最适IPCG诱导浓度。
葡萄糖和IPCG诱导是两个机制。对大肠杆菌来说，葡萄糖存在于培养基时，细胞内cAMP浓度下降，没葡萄糖存在，cAMP浓度高，CAP蛋白可结合高浓度cAMP后变构，与lac操纵子调控序列结合，使lac的三个基因表达上调。
不过IPCG诱导的表达质粒经过改造，你感兴趣可以查一下载体序列，确定有没有CAP-cAMP结合序列。或者你直接问公司的技术支持。
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慎思明辨博学笃行
5楼2014-11-17 22:41:06
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