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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 帮我看看DNA琼脂电泳图吧，拖尾明显，没有主带呀。
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cf_120

新虫 (初入文坛)

[求助] 帮我看看DNA琼脂电泳图吧，拖尾明显，没有主带呀。 已有4人参与

我用的是生工的柱式DNA抽提试剂盒，严格地按照实验步骤操作提取大鼠肝脏基因组DNA，加了RNase，1.5%琼脂电泳，100V约25分钟，80V继续30分钟，DNA marker是从250bp到10kbp，除了最左边的泳道是DNA marker，其他4条泳道都是抽提的基因组DNA，其中左边两条是液氮研磨，右边两条是室温下匀浆的。
问题是，按说未降解的基因组DNA的分子量应该很大，在10kbp的位置是不是应该有一条明显的条带？
而我的电泳图上，呈明显的拖尾现象，根本没有主带呀，是不是DNA发生了降解？而且在250－500bp的位置可以看到模糊的条带，这是RNA吗？
为了消除DNA酶的影响，研钵、离心管、吸头什么的全部高温灭菌过的呀。
会不会是柱式DNA提取试剂盒的问题？
请高手指点！

帮我看看DNA琼脂电泳图吧，拖尾明显，没有主带呀。
20141029 1.5.png
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1楼 2014-10-29 22:16:49
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wml20100762

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-11-07 11:35:34
产生弥散(smear)条带原因:1.合成cDNA的第一链产物含量过高2.PCR反应中引物过多3.循环数过多.4.退火温度过低5DNase降解DNA是产生的寡核苷酸片段产生的非特异性扩增.（摘录的希望对你有用）
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2楼2014-11-03 21:22:18
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fallout76

禁虫 (小有名气)
★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-11-07 11:35:37
本帖内容被屏蔽
3楼2014-11-04 09:51:00
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wanjunfei153

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-11-07 11:35:41
看你的图片，不知道你的组织是否新鲜，还有就是配置的RNase A是否95℃煮沸过，还有就是样品用量不能太多，裂解一定要充分，注意好一些细节提取动物肝脏组织的gDNA是很简单的，希望楼主实验顺利！
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4楼2014-11-06 15:21:22
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Beryl_xu

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-11-07 11:35:45
之前做实验的时候也老出现这问题，是因为我扩的基因AT含量很高，老郁闷了，时间就在PCR与电泳间浪费掉了。你这个基因GC和AT含量是怎样的？DNA没有那么容易降解的，我觉得是别的原因。确定提出了基因组DNA么？
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5楼2014-11-06 15:51:10
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Beryl_xu

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-11-07 11:35:48
或者把电压调低点儿再跑一遍，试试。
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6楼2014-11-06 15:53:42
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