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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DNA电泳样品都留在孔内
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54maozhu

铜虫 (初入文坛)

[求助] DNA电泳样品都留在孔内

求助高手，PCR产物电泳样品都留在孔内，没有条带。1.5%琼脂糖，1乘的TAE。PCR产物理论长度160bp。
为便于交流，以图片形式直接上传！



[ Last edited by wanhscn on 2011-10-27 at 10:39 ]
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1楼 2011-10-27 10:07:46
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考研生涯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

会不会是琼脂糖浓度太高，一般就是0.8—1左右吧
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2楼2011-10-27 11:11:21
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illcf_11

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流！ 2011-10-27 20:46:50
54maozhu(金币+6): 2011-11-03 16:50:10
感觉像是PCR没有进行过，目的片段160bp，琼脂糖1.5%是没有问题的。另外，如果你还有样品，建议你是不是再跑一次，但在跑开1cm的样子就提早拍个照看看。本人出现过，跑的短条带在，跑开了，条带失踪的情况
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3楼2011-10-27 11:19:00
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另一个天堂

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流！ 2011-10-27 20:46:56
首先，你跑了多长时间，电压多大？
如果都没问题，那就是你的PCR产物的问题。还有留在孔洋的不一定是PCR产物
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4楼2011-10-27 11:50:58
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yu19841

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流！ 2011-10-27 20:47:02
估计是在胶制好后，拔梳子的时候把胶孔处弄破了
你的PCR产物全部掉到点样处，所有没在胶上跑出来。

1.5%-2%的胶最容易拔破了
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5楼2011-10-27 12:36:00
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youngker918

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

楼主应该是没有把产物扩出来，加样孔亮是正常的，不是有样在
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天才就怕不够天才，坏又不够坏，天天都想离开，却不知何处才能换骨脱胎
6楼2011-10-27 14:44:46
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illcf_11

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by youngker918 at 2011-10-27 14:44:46:
楼主应该是没有把产物扩出来，加样孔亮是正常的，不是有样在

如果产物没有扩出来，不至于连引物二聚体的条带都没有吧？
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7楼2011-10-27 15:17:39
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peace12039088

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by illcf_11 at 2011-10-27 15:17:39:
如果产物没有扩出来，不至于连引物二聚体的条带都没有吧？

首先，我也认为是产物没有扩来。
如果产物没有扩出来，就是可能在PCR体系配制时忘记加入了某种试剂，可能是Taq酶、可能是dNTps、也可能是少加了一条引物。那么，若是以上3种情况，应该不会出现因为二聚体的吧。
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8楼2011-10-27 16:00:19
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illcf_11

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by peace12039088 at 2011-10-27 16:00:19:
首先，我也认为是产物没有扩来。
如果产物没有扩出来，就是可能在PCR体系配制时忘记加入了某种试剂，可能是Taq酶、可能是dNTps、也可能是少加了一条引物。那么，若是以上3种情况，应该不会出现因为二聚体的吧。

同意！！所以说是PCR没有进行呢
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9楼2011-10-27 16:03:34
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三目

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
amisking(金币+1): 鼓励发帖交流！ 2011-10-27 20:47:10
你的PCR仪没有开始吧，所以DNA根本就没有跑？另外问个问题，你的胶上面有蓝色的条带吗，它远离点样孔吗？如果有蓝色条带，那我前面的话就作废
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10楼2011-10-27 17:09:18
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