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cf_120

新虫 (初入文坛)

[求助] 帮我看看DNA琼脂电泳图吧,拖尾明显,没有主带呀。 已有4人参与

我用的是生工的柱式DNA抽提试剂盒,严格地按照实验步骤操作提取大鼠肝脏基因组DNA,加了RNase,1.5%琼脂电泳,100V约25分钟,80V继续30分钟,DNA marker是从250bp到10kbp,除了最左边的泳道是DNA marker,其他4条泳道都是抽提的基因组DNA,其中左边两条是液氮研磨,右边两条是室温下匀浆的。
问题是,按说未降解的基因组DNA的分子量应该很大,在10kbp的位置是不是应该有一条明显的条带?
而我的电泳图上,呈明显的拖尾现象,根本没有主带呀,是不是DNA发生了降解?而且在250-500bp的位置可以看到模糊的条带,这是RNA吗?
为了消除DNA酶的影响,研钵、离心管、吸头什么的全部高温灭菌过的呀。
会不会是柱式DNA提取试剂盒的问题?
请高手指点!

帮我看看DNA琼脂电泳图吧,拖尾明显,没有主带呀。
20141029 1.5.png
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wml20100762

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-11-07 11:35:34
产生弥散(smear)条带原因:1.合成cDNA的第一链产物含量过高2.PCR反应中引物过多3.循环数过多.4.退火温度过低5DNase降解DNA是产生的寡核苷酸片段产生的非特异性扩增.(摘录的希望对你有用)
2楼2014-11-03 21:22:18
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fallout76

禁虫 (小有名气)

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-11-07 11:35:37
本帖内容被屏蔽

3楼2014-11-04 09:51:00
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wanjunfei153

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-11-07 11:35:41
看你的图片,不知道你的组织是否新鲜,还有就是配置的RNase A是否95℃煮沸过,还有就是样品用量不能太多,裂解一定要充分,注意好一些细节提取动物肝脏组织的gDNA是很简单的,希望楼主实验顺利!
4楼2014-11-06 15:21:22
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Beryl_xu

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-11-07 11:35:45
之前做实验的时候也老出现这问题,是因为我扩的基因AT含量很高,老郁闷了,时间就在PCR与电泳间浪费掉了。你这个基因GC和AT含量是怎样的?DNA没有那么容易降解的,我觉得是别的原因。确定提出了基因组DNA么?
5楼2014-11-06 15:51:10
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Beryl_xu

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-11-07 11:35:48
或者把电压调低点儿再跑一遍,试试。
6楼2014-11-06 15:53:42
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