| 查看: 3687 | 回复: 1 | ||
[求助]
关于6%的尿素聚丙烯酰胺变性凝胶来跑RNA的一些问题
|
|
由于是第一次做这个，所以都是一大堆的问题，希望大家多多发言，谢谢。 我要建RNA测序文库，要筛选50-500bp大小的RNA，但是考虑到要固定RNA的二级结构，所以，要用6%的尿素聚丙烯酰胺变性凝胶来跑，我用的marker是• Radiolabeled Decade and Century markers (Life Technologies)货号：am7778，这个marker，loading buffer是marker中带的，现在问题如下： 1.这个凝胶的配方是什么，是我们平时的蛋白胶的配方吗？就是水，30%丙烯酰胺，tris，sds，过硫酸铵，temed？是只有分离胶，没有浓缩胶哈？ 2.电泳缓冲液的配方是什么，是我们平时跑蛋白的时候，用的tbe（tris，甘氨酸，edta）吗？还是有什么新的配方。 3.试验中需要注意些什么？比如说，电泳的时候，电泳buffer中需要加些什么东西吗？比如甲酰胺或者尿素，还有听说在上样的时候要吹上样孔？就是用电泳buffer反复清洗上样孔吗？ 4.试验中都要保证是RNase free环境吗?怎么保证？ 5.染胶用eb就可以嘛？切胶再在外线切胶台就ok？拍照的话，就是在紫外曝光仪中就可以嘛？ 6.上样的时候loading buffer中还要加其他东西吗？像甲酰胺或者尿素之类的。 7.还有就是甲酰胺或者尿素这个东西在这个实验中要用到嘛？在哪一步用到？ 问题就这么多？请大家踊跃发言，多谢多谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有263人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 短RNA的变性聚丙烯酰胺电泳
已经有7人回复
- 尿素胶跑DNA（PCR产物），变性不完全
已经有12人回复
- SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳成像结果的若干问题
已经有6人回复
- 蛋白非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳没有条带
已经有7人回复
- 同样长度的单链DNA与双链DNA为什么跑聚丙烯酰胺变性胶，条带会出现在不同的位置
已经有15人回复
- 为什么我的DNA 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 跑成这个鬼样？
已经有12人回复
- 【求助】蛋白质非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
已经有16人回复
- 请教为什么我的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后条带有些弥散！
已经有9人回复
- DNA非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳所用loading buffer
已经有7人回复
- 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳电压方面的问题
已经有20人回复
- 非变性聚丙烯酰胺凝胶不聚合
已经有7人回复
- 聚丙烯酰胺凝胶电泳问题的讨论
已经有17人回复
- 6%变性聚丙烯酰胺凝胶总是凝的不好 求指点 急啊 谢谢了
已经有43人回复
- 聚丙烯酰胺胶中尿素的作用是什么？
已经有4人回复
- 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，染色问题
已经有8人回复
- 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳制板的问题
已经有24人回复
- 【求助】变性聚丙烯酰胺电泳的marker怎么处理
已经有9人回复
- 【求助/交流】请教聚丙烯酰胺凝胶问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】非变性聚丙烯酰胺电泳
已经有13人回复
- 【求助/交流】有意思的rna非变性凝胶电泳-之真相大白
已经有10人回复
zuohuaangel
铜虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 376.8
- 散金: 10
- 红花: 3
- 帖子: 150
- 在线: 30小时
- 虫号: 216865
- 注册: 2006-03-12
- 性别: MM
- 专业: 药物化学
2楼2015-08-07 14:31:57
20