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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » RT-PCR为什么要进行两轮PCR？
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lialee22

木虫 (著名写手)

黑钻会员

[求助] RT-PCR为什么要进行两轮PCR？ 已有2人参与

RT-PCR
第一步是反转录得到单链的cDNA（1个循环）；
第二步是用F引物和通用引物（M13M4）PCR（30循环）；
第三部是用F和R进行PCR（30循环），得到目的基因。

喂猫不在得到cDNA之后，直接用F和R进行一次PCR，得到目的基因？喂猫要先用通用引物P？

求解！
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诸事顺遂
1楼 2014-10-23 10:05:36
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lialee22

木虫 (著名写手)

黑钻会员
引用回帖:
2楼: Originally posted by 楚云猛 at 2014-10-23 12:56:09
你用的是两步法反转，第二步你确定是跑三十个循环么？应该是一个吧？

是30个。我没写错。我也不懂。直接用F和R不就好了吗？为什么要多一步出来。
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诸事顺遂
3楼2014-10-23 19:17:15
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匿名

用户注销 (著名写手)
★
感谢参与，应助指数 +1
lialee22(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-24 21:00:16
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2楼2014-10-23 12:56:09
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匿名

用户注销 (著名写手)
★ ★ ★ ★
lialee22: 金币+4, ★★★★★最佳答案 2014-11-20 18:45:35
本帖仅楼主可见
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4楼2014-10-27 23:32:01
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

1、合成一条cDNA链
2、利用通用引物合成不同片段的大小不一的DNA双链，其中就包含你的目的基因的模板链
3、目的基因的扩增
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生物化学与分子生物学
5楼2014-10-28 11:46:36
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