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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR拖带严重
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镜子的诱惑

铜虫 (小有名气)

[求助] PCR拖带严重 已有4人参与

PCR扩增片段时，无目的条带，但泳道成弥散亮带，应该是拖带严重，多次这样，也曾用同样体系扩出过条带，不知是何原因，请各位多多指教。谢过！
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1楼 2014-10-15 16:40:17
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 镜子的诱惑 at 2014-10-16 10:43:46
换体系是改变体系的大小吗？我用的是20微升的体系，换别人的体系是什么意思啊 ，...

我们一般用25uL体系，换体系指的是换别人的PCR反应体系，用别人的Buffer、dNTP、Taq酶等
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
6楼2014-10-16 10:52:52
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koujie1986

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
镜子的诱惑(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-10-15 19:04:24
既然扩出过目的片段，说明引物、模板本来是没问题的。
出现拖尾的可能原因是，气溶胶引起非特异扩增增多。建议你更换水、mix，操作台用1%次氯酸钠擦拭后再操作试试。
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2楼2014-10-15 16:54:14
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镜子的诱惑

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by koujie1986 at 2014-10-15 16:54:14
既然扩出过目的片段，说明引物、模板本来是没问题的。
出现拖尾的可能原因是，气溶胶引起非特异扩增增多。建议你更换水、mix，操作台用1%次氯酸钠擦拭后再操作试试。

多谢。我试一下。多谢啊
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3楼2014-10-15 18:47:22
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1、没有目的条带可以降低退火温度或者更换模板试试
2、有弥散条带可能是反应体系有污染，试着换别人的体系看看
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
4楼2014-10-15 19:07:09
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