应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 大家帮忙看下，这个拖带这么严重，但是视乎没有条带，什么情况？是不是加的量太大了？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
241/3返回列表123下一页
查看: 2070  |  回复: 23
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

liuyil

银虫 (小有名气)

[求助] 大家帮忙看下，这个拖带这么严重，但是视乎没有条带，什么情况？是不是加的量太大了？ 已有1人参与

大家帮忙看下，这个拖带这么严重，但是视乎没有条带，什么情况？是不是加的量太大了？两边是一些随机连接的DNA片段，大小不一，大家出出注意！

大家帮忙看下，这个拖带这么严重，但是视乎没有条带，什么情况？是不是加的量太大了？
Administrator 2014-04-24 21hr 26min.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
未来不知道会怎么样，做好当下最重要。
1楼 2014-04-25 09:40:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

biostar2009

专家顾问 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+5, 十分感谢提供应助 2014-04-25 14:00:27
引用回帖:
6楼: Originally posted by liuyil at 2014-04-25 13:08:27
是的，就是让这些小片段随机连接，但是我想的结果应该是一条条的带，我就是想看下条带大小的分布，连接的效率这些，怎么会出现这种情况，想了一早上没想通，求教啊...

能不能出现ladder，还是smear，这取决于你的检测系统的分辨率，更取决于你的DNA单体的大小分布，且不谈还有单链和环状产物的问题。
你要是20-70，比如5bp间隔分布的，别说连接之后，你就是连接之前，用agarose gel，仍然还是smear。
一个smear的DNA群体，连接不可能100%的效率，最后还是一个smear
如果再算上分子内连接产生的环状产物，这个问题没法分析。
另外一个方面，你的样品干不干净，这个非常影响分辨率。
很多工具酶，都有很强的DNA亲和力，比如一些内切酶，碱性磷酸酶，我记得T4 DNA ligase好像也是，说明书一般会强调。这种情况反应产物必须酚抽去蛋白之后才有可能跑得开。

我想起你了，你就是问T4PNK的那个是吧？

如果你听我的建议，如果你真心想去评估连接效率，你应该用同位素检测，即T4 PNk标记的时候，先让同位素标记上一部分，再大量加入ATP，连接之后，用碱性磷酸酶处理，看同位素信号还可以保留多少。你这个体系肯定是多份连接的。很多末端会连到分子内部，抵抗碱性磷酸酶的作用。
很多连接酶的活性跟踪就是这样做的。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2014-04-25 13:35:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuyil

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-04-25 06:38:42
。。。
好吧，当我白说一通。。。
版主，别再@我了...

不好意思，这个是我还没有看见你的回复的时候发的，太感谢你了
赞一下(1人) 回复此楼
未来不知道会怎么样，做好当下最重要。
10楼2014-04-25 13:54:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

liuyil

银虫 (小有名气)
补充：这里面还有连接酶这些，连接后的产物，未纯化，只是想先跑个胶看下条带的分布，谢谢
赞一下 回复此楼
未来不知道会怎么样，做好当下最重要。
2楼2014-04-25 10:29:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuyil

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liuyil at 2014-04-25 03:29:29
补充：这里面还有连接酶这些，连接后的产物，未纯化，只是想先跑个胶看下条带的分布，谢谢

补充：连接体系中是一些长度在20-70 bp的DNA小片段，然后在T4 DNA连接酶的作用下进行连接，14 度，24 h，将连接产物直接跑1%的琼脂糖电泳，图就这样了，打下们帮忙分析下！
赞一下 回复此楼
未来不知道会怎么样，做好当下最重要。
3楼2014-04-25 11:54:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
@天使托   @blackrose8089   @凌波丽   @cicelyzh   @biostar2009   帮忙解决一下
回复此楼
植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
4楼2014-04-25 12:46:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
liuyil: 金币+5, ★有帮助 2014-04-25 13:09:04
liuyil: 金币+15, ★★★★★最佳答案 2014-04-25 13:55:24
引用回帖:
4楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-04-25 12:46:05
天使托   blackrose8089   凌波丽   cicelyzh   biostar2009   帮忙解决一下

这很正常，你20～70bp的DNA，大家都可以首尾相连的话，肯定成这样，产物大小说不定服从正态分布。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
5楼2014-04-25 12:51:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuyil

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-04-25 05:51:57
这很正常，你20～70bp的DNA，大家都可以首尾相连的话，肯定成这样，产物大小说不定服从正态分布。
...

是的，就是让这些小片段随机连接，但是我想的结果应该是一条条的带，我就是想看下条带大小的分布，连接的效率这些，怎么会出现这种情况，想了一早上没想通，求教啊
赞一下 回复此楼
未来不知道会怎么样，做好当下最重要。
6楼2014-04-25 13:08:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuyil

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-04-25 05:51:57
这很正常，你20～70bp的DNA，大家都可以首尾相连的话，肯定成这样，产物大小说不定服从正态分布。
...

是不是片段太多了，大小太接近，所以连成一片，没法区分大小，所以成弥散状呢？其他的我想不出来了
赞一下 回复此楼
未来不知道会怎么样，做好当下最重要。
8楼2014-04-25 13:36:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biostar2009

专家顾问 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by liuyil at 2014-04-25 13:36:39
是不是片段太多了，大小太接近，所以连成一片，没法区分大小，所以成弥散状呢？其他的我想不出来了...

。。。
好吧，当我白说一通。。。
版主，别再@我了
赞一下 回复此楼
9楼2014-04-25 13:38:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liuyil 的主题更新
241/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 318求调剂 +11 ykyhsa 2026-04-05 13/650 2026-04-05 12:44 by aidndnjck
[考研] 材料0856 英一数二 323 求调剂 +11 袁sy 2026-04-01 11/550 2026-04-05 11:30 by 风雨无晴
[考研] 调剂求助 +10 想换手机不想解� 2026-04-02 13/650 2026-04-05 09:41 by sam3303
[考研] 283求调剂 +10 A child 2026-04-04 10/500 2026-04-05 08:22 by qlm5820
[考研] 278求调剂 +14 范婷娜 2026-04-04 15/750 2026-04-04 22:15 by lqwchd
[考研] 341求调剂 +3 洛多罗 2026-04-02 4/200 2026-04-04 21:36 by 智能智慧
[考研] 材料调剂 +12 一样YWY 2026-04-02 13/650 2026-04-04 20:49 by 蓝云思雨
[考研] 085601一志愿北理325分求调剂 +6 找调剂，， 2026-04-02 6/300 2026-04-03 22:20 by 柟�?
[考研] 070300一志愿211，312分求调剂院校 +16 小黄鸭宝 2026-03-30 16/800 2026-04-03 19:53 by lijunpoly
[考研] 343求调剂085601 +6 要努力学习x 2026-03-29 7/350 2026-04-03 19:49 by 百灵童888
[硕博家园] 求老师收留 +9 lllq123 2026-04-03 9/450 2026-04-03 13:48 by 呼吸都是减肥
[考研] 295求调剂 +7 愿旅途永远坦然 2026-04-02 7/350 2026-04-03 08:22 by fangshan711
[考研] 调剂 +3 好好读书。 2026-04-01 6/300 2026-04-02 15:49 by liumengping
[考研] 材料专业求调剂 +10 月月鸟木 2026-04-01 10/500 2026-04-02 12:57 by wxiongid
[考研] 求调剂推荐 +3 南山南@ 2026-04-01 3/150 2026-04-02 12:09 by xiaoranmu
[考研] 085410 一志愿211 22408分数359求调剂 +3 123456789qw 2026-03-31 4/200 2026-04-02 00:06 by 义文wang
[考研] 307分求调剂 +14 (o~o) 2026-03-31 15/750 2026-04-01 20:43 by longlotian
[考研] 284求调剂 +12 小熊～～ 2026-03-31 12/600 2026-04-01 20:23 by 花??
[考研] 0703一志愿南师大334求调剂 +4 seven7yu 2026-03-30 4/200 2026-04-01 16:10 by oooqiao
[考研] 085602 化学工程专硕 340分求调剂 +4 qianbai11 2026-03-29 4/200 2026-03-30 11:34 by 唐沐儿
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭