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高CG重复和连续序列怎么P出来 已有3人参与
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1. 以下是我打算P的序列，引物设计决不是问题，但就是P不出来，一次P出来了大小还不对，求帮助 ttaaccctagaaagataatcatattgtgacgtacgttaaagataatcatgcgtaaaattgacgcatgtgttttatcggtctgtatatcgaggtttatttattaatttgaatagatattaagttttattatatttacacttacatactaataataaattcaacaaacaatttatttatgtttatttatttattaaaaaaaaacaaaaactcaaaatttcttctataaagtaacaaa 2. 下面这一段也是要P的，目的应该有800bp左右，但就是总P出300bp左右的条带。检查引物特异性，也没得说，好的很 cgttacataacttacggtaaatggcccgcctggctgaccgcccaacgacccccgcccattgacgtcaatagtaacgccaatagggactttccattgacgtcaatgggtggagtatttacggtaaactgcccacttggcagtacatcaagtgtatcatatgccaagtacgccccctattgacgtcaatgacggtaaatggcccgcctggcattgtgcccagtacatgaccttatgggactttcctacttggcagtacatctacgtattagtcatcgctattaccatggtcgaggtgagccccacgttctgcttcactctccccatctcccccccctccccacccccaattttgtatttatttattttttaattattttgtgcagcgatgggggcggggggggggggggggcgcgcgccaggcggggcggggcggggcgaggggcggggcggggcgaggcggagaggtgcggcggcagccaatcagagcggcgcgctccgaaagtttccttttatggcgaggcggcggcggcggcggccctataaaaagcgaagcgcgcggcgggcgggagtcgctgcgacgctgccttcgccccgtgccccgctccgccgccgcctcgcgccgcccgccccggctctgactgaccgcgttactcccacaggtgagcgggcgggacggcccttctcctccgggctgtaattagctgagcaagaggtaagggtttaagggatggttggttggtggggtattaatgtttaattacctggagcacctgcctgaaatcactttttttcaggttgg。非常高的连续G或C。 |
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syn1985
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陈日飞(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-10-07 18:27:21
陈日飞: 金币+27, ★★★很有帮助, 咨询了其他教授，也是这种办法，我试试 2014-10-08 15:17:21
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我猜你这是链霉菌的模板 一定要用GC buffer TAKARA有两种： GC I 和GC II， 先用I试一下， 实在不行再用II，DMSO是必须加的，浓度是50ul体系里面加2.5的DMSO 还有就是退火温度要低 （我最低到40度） 我做过模板GC含量都在80以上的 就要这些方法 引物随便设 基因扩出来基本都是一条目的条带 扩过12Kb的高GC片段 一样好用 祝好运 |
6楼2014-10-07 11:32:10
jonew
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jonew
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5楼2014-10-07 11:17:09
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