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PCR引物退火温度怎么计算？
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最近做PCR设计了一对引物，引物序列为： F:CGTGCCTCCTATCCACGATTCCG R:ATTTTGCGTAATTGGGTTTGATT 引物序列和模版完全配对的，可是实验的时候成功率很低，每次都只能扩增出来不多几个样本，引物合成报告单上正向引物的Tm值65.5度，反向引物53度，是不是因为两条引物的Tm值相差太大啊？已经尝试了好几个温度了还是扩增效率很低？ 求高手帮忙分析哪里出问题了，需要重新设计引物吗，有个同学说可以给反向引物的5'端增加几个碱基提高一下退火温度，这样做可以吗？每条引物的退火温度怎样单独计算啊？ |
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