应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 定点突变出现的问题出现重复序列
251/1返回列表
查看: 3852  |  回复: 24
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zcf1990

银虫 (初入文坛)

[交流] 定点突变出现的问题出现重复序列

我在做定点突变出现以下问题：我想讲227位的F突变成S其序列入下图：

ACCAGAGCCATTCTGCAAAGTGGTTCCSample TextAATGCTCCTTGGGCGGCCATTCTGCAAAGTGGTT
CCSample TextAATGCTCCTTGGGCGGGCCATTCTGCAAAGTGGTTCCTCCAATGCTCCTTGGGCGGTGCCATTCTGCAAAGTGGT
TCCTCCAATGCTCCT
红色为突变的点，氨基酸突变没有问题，可是长度却重复了相同的引物长度4次，不知道哪里出了问题~~求解~~
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累 EndNoteX7VOL.rar 博士学习 重复序列PCR扩增

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-07-24 14:22:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

ccharlien

木虫 (正式写手)
引用回帖:
20楼: Originally posted by zcf1990 at 2013-07-26 08:26:06
我们实验室两个不同方向的定点突变都碰到这种问题，而且是不同的人不同时间做的反应，先前怀疑是反应的buffer或者是试剂有问题，可是换了之后还是没有解决这个问题~~真心希望碰到过的朋友帮忙解决下，要不然一直在 ...

我觉得要么是pcr程序问题要么是引物的问题
赞一下(1人) 回复此楼
21楼2013-07-26 15:36:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

personalpc

金虫 (著名写手)
★
zcf1990(金币+1): 谢谢参与
帮顶
回复此楼
5楼2013-07-24 15:24:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★
zcf1990(金币+1): 谢谢参与
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-24 16:41:27
PCR过程中引入的，连续几段突变引物，重新挑取其他克隆测序，肯定有正常突变的。
赞一下 回复此楼
8楼2013-07-24 16:20:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bullfrog325

木虫 (正式写手)
★
zcf1990(金币+1): 谢谢参与
一楼正解, 多挑几个克隆就成
赞一下 回复此楼
11楼2013-07-24 18:03:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zcf1990

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-07-24 16:20:33
PCR过程中引入的，连续几段突变引物，重新挑取其他克隆测序，肯定有正常突变的。

不止一次出现，有没有办法抵制这种现象的发生~~我小老板说他做克隆从来没出现这种现象，还说他的克隆只挑一个，而且都是对的~~
赞一下 回复此楼
13楼2013-07-24 20:55:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
zcf1990: 金币+2, 现在重新做，希望能减少这种现象的产生~~ 2013-07-25 08:34:08
引用回帖:
13楼: Originally posted by zcf1990 at 2013-07-24 20:55:46
不止一次出现，有没有办法抵制这种现象的发生~~我小老板说他做克隆从来没出现这种现象，还说他的克隆只挑一个，而且都是对的~~...

减少模板和引物的用量，同时循环数减少到20-25循环。
赞一下 回复此楼
14楼2013-07-25 07:50:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amalio

银虫 (小有名气)
★
zcf1990(金币+1): 谢谢参与
很正常，我也遇见过！但是一般只插入一段引物，而且有的还是正常的，像楼主这样的还是很少见！
赞一下 回复此楼
15楼2013-07-25 09:33:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zcf1990

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by amalio at 2013-07-25 09:33:30
很正常，我也遇见过！但是一般只插入一段引物，而且有的还是正常的，像楼主这样的还是很少见！

那你有没有克服这个问题 ，据小老板说他做一次对一次，重来没遇到过~~
赞一下 回复此楼
17楼2013-07-25 17:29:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ccharlien

木虫 (正式写手)
★
zcf1990(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
17楼: Originally posted by zcf1990 at 2013-07-25 17:29:25
那你有没有克服这个问题 ，据小老板说他做一次对一次，重来没遇到过~~...

你小老板说的也不算夸张了
我做的十几次定点突变质粒 也没遇到过你这情况
一般挑三个测序 至少两个是对的
赞一下 回复此楼
18楼2013-07-26 04:48:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zcf1990

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
18楼: Originally posted by ccharlien at 2013-07-26 04:48:40
你小老板说的也不算夸张了
我做的十几次定点突变质粒 也没遇到过你这情况
一般挑三个测序 至少两个是对的...

我们实验室两个不同方向的定点突变都碰到这种问题，而且是不同的人不同时间做的反应，先前怀疑是反应的buffer或者是试剂有问题，可是换了之后还是没有解决这个问题~~真心希望碰到过的朋友帮忙解决下，要不然一直在这个问题上纠结~·
赞一下 回复此楼
20楼2013-07-26 08:26:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amalio

银虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by zcf1990 at 2013-07-25 17:29:25
那你有没有克服这个问题 ，据小老板说他做一次对一次，重来没遇到过~~...

我的只是偶尔出现没有去管它
赞一下 回复此楼
22楼2013-07-27 14:44:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王冠傑

铁虫 (小有名气)
★
zcf1990(金币+1): 谢谢参与
引物合成纯度不可能达到100%，你的小老板运气实在是太好了。一半多挑几个克隆就行。
赞一下 回复此楼
23楼2015-05-11 08:37:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Evelyn19

新虫 (初入文坛)
★
zcf1990(金币+1): 谢谢参与
楼主现在有解决这个问题的办法了吗
赞一下 回复此楼
24楼2015-12-14 11:56:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinshengfang

木虫 (正式写手)
★
zcf1990(金币+1): 谢谢参与
我p质粒突变也出现了跟楼主一样的问题，我的引物序列重复了一次，请问楼主解决问题了吗？多挑几个送测序就能对吗？
赞一下 回复此楼
25楼2016-01-05 11:28:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
3305754152楼
2013-07-24 14:58   回复  
zcf1990(金币+1): 谢谢参与
chenleilei3楼
2013-07-24 15:04   回复  
zcf1990(金币+1): 谢谢参与
readytogo4楼
2013-07-24 15:08   回复  
zcf1990(金币+1): 谢谢参与
syhorchid6楼
2013-07-24 15:44   回复  
zcf1990(金币+1): 谢谢参与
hyphen0077楼
2013-07-24 16:20   回复  
zcf1990(金币+1): 谢谢参与
ericyo9189楼
2013-07-24 16:47   回复  
zcf1990(金币+1): 谢谢参与
lefantian12210楼
2013-07-24 17:01   回复  
zcf1990(金币+1): 谢谢参与
yingying158812楼
2013-07-24 18:50   回复  
zcf1990(金币+1): 谢谢参与
shanqian198816楼
2013-07-25 13:48   回复  
zcf1990(金币+1): 谢谢参与
chenyh71819楼
2013-07-26 07:09   回复  
zcf1990(金币+1): 谢谢参与
相关版块跳转 我要订阅楼主 zcf1990 的主题更新
251/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭