应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR定点突变遇到问题
101/1返回列表
查看: 2388  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zcf1990

银虫 (初入文坛)

[求助] PCR定点突变遇到问题 已有3人参与

亲们，我在做定点突变，但是碰到了以下问题；看哪位高手有没有碰到我这种情况：
我的PCR整个过程没有问题，克隆也能顺利长出；测序后与正向引物比对发现以下问题,就是引物比对是对的，引物之前的碱基也是对的，该突变的位点也是对的；但是在引物最后的碱基又接了一段一模一样的引物片段，等于重复了一模一样的引物长度；在重复的引物片段又能接上模板之后的序列；该种情况不止出现一次；求解~~~
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-06-13 20:47:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaodahe

木虫 (正式写手)
扩增完了你切胶回收的吗？会不会是连接进去的？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
2楼2013-06-14 08:16:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zcf1990

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaodahe at 2013-06-14 08:16:53
扩增完了你切胶回收的吗？会不会是连接进去的？

我单纯的做定点突变，不需要胶回收；扩增完了，直接用DPnI去甲基化后转化~~
赞一下 回复此楼
3楼2013-06-14 08:23:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

水花微谢

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
减少引物浓度试试
赞一下 回复此楼
4楼2013-06-14 12:31:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zcf1990

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 水花微谢 at 2013-06-14 12:31:32
减少引物浓度试试

请问你有碰到过这种情况吗？我分析不出到底是PCR中哪里出了问题~~
赞一下 回复此楼
5楼2013-06-14 12:40:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

A_there

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaodahe at 2013-06-14 08:16:53
扩增完了你切胶回收的吗？会不会是连接进去的？

我切胶回收后也出现楼主的情况了 请问你知道为什么会连进去吗？
谢谢~
赞一下 回复此楼
6楼2013-10-25 08:50:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

junefan7896

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我也出现了这样的情况，可能的原因有两个，引物的质量不行，用HPSF的活HPLC纯化的引物试试，另外我剪短了退火时间，就只有一个repeat了
赞一下 回复此楼
7楼2014-11-20 22:52:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

花散夕阳

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

再挑一个试试，不行就重p，我今天遇到了一样的问题，6个点突变，其中竟然就有两个是这样的问题
赞一下 回复此楼
8楼2015-12-10 19:24:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zl2670053160

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 花散夕阳 at 2015-12-10 19:24:00
再挑一个试试，不行就重p，我今天遇到了一样的问题，6个点突变，其中竟然就有两个是这样的问题

最近我也在做这部分工作，遇到了点麻烦，想要和前辈们问问。望不吝赐教。
赞一下 回复此楼
9楼2016-07-11 11:44:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zl2670053160

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

最近做这方面的内容，点突变遇到了点问题，望请教
赞一下 回复此楼
10楼2016-07-11 11:46:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zcf1990 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭