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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 定点突变出现的问题出现重复序列
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zcf1990

银虫 (初入文坛)

[交流] 定点突变出现的问题出现重复序列

我在做定点突变出现以下问题：我想讲227位的F突变成S其序列入下图：

ACCAGAGCCATTCTGCAAAGTGGTTCCSample TextAATGCTCCTTGGGCGGCCATTCTGCAAAGTGGTT
CCSample TextAATGCTCCTTGGGCGGGCCATTCTGCAAAGTGGTTCCTCCAATGCTCCTTGGGCGGTGCCATTCTGCAAAGTGGT
TCCTCCAATGCTCCT
红色为突变的点，氨基酸突变没有问题，可是长度却重复了相同的引物长度4次，不知道哪里出了问题~~求解~~
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1楼 2013-07-24 14:22:54
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★
zcf1990(金币+1): 谢谢参与
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-24 16:41:27
PCR过程中引入的，连续几段突变引物，重新挑取其他克隆测序，肯定有正常突变的。
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8楼2013-07-24 16:20:33
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bullfrog325

木虫 (正式写手)
★
zcf1990(金币+1): 谢谢参与
一楼正解, 多挑几个克隆就成
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11楼2013-07-24 18:03:38
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zcf1990

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-07-24 16:20:33
PCR过程中引入的，连续几段突变引物，重新挑取其他克隆测序，肯定有正常突变的。

不止一次出现，有没有办法抵制这种现象的发生~~我小老板说他做克隆从来没出现这种现象，还说他的克隆只挑一个，而且都是对的~~
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13楼2013-07-24 20:55:46
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
zcf1990: 金币+2, 现在重新做，希望能减少这种现象的产生~~ 2013-07-25 08:34:08
引用回帖:
13楼: Originally posted by zcf1990 at 2013-07-24 20:55:46
不止一次出现，有没有办法抵制这种现象的发生~~我小老板说他做克隆从来没出现这种现象，还说他的克隆只挑一个，而且都是对的~~...

减少模板和引物的用量，同时循环数减少到20-25循环。
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14楼2013-07-25 07:50:55
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