应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » GST融合蛋白包涵体如何纯化？
71/1返回列表
查看: 2637  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

jza63

铁虫 (初入文坛)

[求助] GST融合蛋白包涵体如何纯化？ 已有3人参与

这是我诱导后跑的蛋白电泳图，第一个蛋白大概100KD左右（第2泳道），第二个蛋白大概70KD（第9个泳道），这两个都是GST标签蛋白，经细胞破碎验证后发现这两个蛋白都是在包涵体中，不是在上清里，诱导条件是：37℃，5h,140rpm。。。 请问我该怎么改变条件能够使他们能在上清中表达，就是能够分泌表达；或者GST标签蛋白在包涵体中的话该怎么去纯化，非常感谢，急用，谢谢

GST融合蛋白包涵体如何纯化？
菌.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-09-28 23:04:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxy_0808

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助！ 2014-11-19 09:21:48
大肠杆菌中表达gst蛋白一般都是包涵体，你一般破碎后，10000g离心去细胞碎片，上清上蛋白质纯化仪（gst亲和层析柱），酶切，紫外检测收集，即可，后续可以sds-page检测下分离纯化效果。
我是这么做的，你再看看还有没有更好的办法。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
2楼2014-09-29 00:24:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jza63

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wxy_0808 at 2014-09-29 00:24:15
大肠杆菌中表达gst蛋白一般都是包涵体，你一般破碎后，10000g离心去细胞碎片，上清上蛋白质纯化仪（gst亲和层析柱），酶切，紫外检测收集，即可，后续可以sds-page检测下分离纯化效果。
我是这么做的，你再看看还有 ...

破碎后上清中没有蛋白，都在包涵体中，就是在破碎后的沉淀中，不知道该用什么方法去从包涵体中纯化出蛋白
赞一下 回复此楼
3楼2014-09-30 09:03:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

super_mm

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

1. 想要增加目的蛋白的溶解度，可以降低诱导温度30度 25度 22度试试，或者适当降低IPTG的浓度。
2. 包涵体蛋白更好纯化啊，不过看你的包涵体杂蛋白挺多，超声破碎的力度好像不大够啊，首先洗涤包涵体，你的缓冲液中加2M尿素，重悬下沉淀洗一洗后离心，然后溶解包涵体，用buffer加6-8M尿素重悬包涵体，最好过夜搅拌溶解，然后按照gst标签蛋白纯化方法纯化就行，只是所有溶液中都加上6-8M尿素，纯化以后再想办法复性，去除尿素保持目的蛋白的活性。
赞一下 回复此楼
4楼2014-10-13 10:18:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jza63

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by super_mm at 2014-10-13 10:18:19
1. 想要增加目的蛋白的溶解度，可以降低诱导温度30度 25度 22度试试，或者适当降低IPTG的浓度。
2. 包涵体蛋白更好纯化啊，不过看你的包涵体杂蛋白挺多，超声破碎的力度好像不大够啊，首先洗涤包涵体，你的缓冲液中 ...

我的诱导温度已经降到17℃了，还是只在包涵体中表达，感觉可能是因为蛋白分子量比较大，不好分泌表达。GST的蛋白包涵体溶解一般是在盐酸胍中吧，尿素的话对于上柱是有影响的，现在在尝试用SDS溶解，请问您对蛋白复性方面有什么见解，现在在发愁复性的问题，不知道如何配制复性液
赞一下 回复此楼
5楼2014-10-13 19:12:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenyuanxmc

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

可以尝试在低温，低诱导剂条件下，与伴侣蛋白共表达
赞一下 回复此楼
6楼2014-11-16 22:10:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

分子白痴

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by super_mm at 2014-10-13 10:18:19
1. 想要增加目的蛋白的溶解度，可以降低诱导温度30度 25度 22度试试，或者适当降低IPTG的浓度。
2. 包涵体蛋白更好纯化啊，不过看你的包涵体杂蛋白挺多，超声破碎的力度好像不大够啊，首先洗涤包涵体，你的缓冲液中 ...

请问有没有具体的纯化流程啊？急需啊，拜托拜托啊！
赞一下 回复此楼
7楼2016-05-09 22:11:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jza63 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 i3cz6qj6l2 2026-02-17 3/150 2026-02-18 11:09 by lqtl9djx19
[考博] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 i3cz6qj6l2 2026-02-17 3/150 2026-02-18 10:54 by lqtl9djx19
[考研] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 i3cz6qj6l2 2026-02-17 3/150 2026-02-18 10:39 by lqtl9djx19
[考研] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 3/150 2026-02-18 08:53 by lqtl9djx19
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 3/150 2026-02-18 08:38 by lqtl9djx19
[找工作] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 pnpwoqbg8f 2026-02-17 4/200 2026-02-18 07:55 by lotyj5cz79
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-16 4/200 2026-02-18 07:40 by lotyj5cz79
[考研] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 pnpwoqbg8f 2026-02-16 4/200 2026-02-18 07:38 by lotyj5cz79
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 pnpwoqbg8f 2026-02-16 4/200 2026-02-18 07:23 by lotyj5cz79
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 pnpwoqbg8f 2026-02-16 4/200 2026-02-18 07:08 by lotyj5cz79
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-16 3/150 2026-02-18 06:53 by lotyj5cz79
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 3/150 2026-02-18 00:40 by tk2gfblvuz
[找工作] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 4/200 2026-02-18 00:23 by tk2gfblvuz
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 3/150 2026-02-17 23:40 by tk2gfblvuz
[基金申请] 基金正文30页指的是报告正文还是整个申请书 +3 successhe 2026-02-16 4/200 2026-02-17 20:56 by successhe
[基金申请] 今年春晚有几个节目很不错，点赞！ +5 瞬息宇宙 2026-02-16 6/300 2026-02-17 12:49 by jymy19840415
[微米和纳米] 球磨粉体时遇到了大的问题，请指教！ 10+3 6sbiam 2026-02-12 15/750 2026-02-16 15:03 by tgzxzqj
[基金申请] 过年走亲戚时感受到了所开私家车的鄙视链 +3 瞬息宇宙 2026-02-15 5/250 2026-02-16 14:23 by aspect3000
[基金申请] 情人节自我反思：在爱情中有过遗憾吗？ +4 瞬息宇宙 2026-02-15 5/250 2026-02-15 22:28 by baiboxie
[硕博家园] 江汉大学解明教授课题组招博士研究生/博士后 +3 cleverlyy 2026-02-12 3/150 2026-02-12 21:02 by qsdf1
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭