应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » GST融合蛋白包涵体如何纯化？
71/1返回列表
查看: 2644  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

jza63

铁虫 (初入文坛)

[求助] GST融合蛋白包涵体如何纯化？ 已有3人参与

这是我诱导后跑的蛋白电泳图，第一个蛋白大概100KD左右（第2泳道），第二个蛋白大概70KD（第9个泳道），这两个都是GST标签蛋白，经细胞破碎验证后发现这两个蛋白都是在包涵体中，不是在上清里，诱导条件是：37℃，5h,140rpm。。。 请问我该怎么改变条件能够使他们能在上清中表达，就是能够分泌表达；或者GST标签蛋白在包涵体中的话该怎么去纯化，非常感谢，急用，谢谢

GST融合蛋白包涵体如何纯化？
菌.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-09-28 23:04:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxy_0808

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助！ 2014-11-19 09:21:48
大肠杆菌中表达gst蛋白一般都是包涵体，你一般破碎后，10000g离心去细胞碎片，上清上蛋白质纯化仪（gst亲和层析柱），酶切，紫外检测收集，即可，后续可以sds-page检测下分离纯化效果。
我是这么做的，你再看看还有没有更好的办法。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
2楼2014-09-29 00:24:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jza63

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wxy_0808 at 2014-09-29 00:24:15
大肠杆菌中表达gst蛋白一般都是包涵体，你一般破碎后，10000g离心去细胞碎片，上清上蛋白质纯化仪（gst亲和层析柱），酶切，紫外检测收集，即可，后续可以sds-page检测下分离纯化效果。
我是这么做的，你再看看还有 ...

破碎后上清中没有蛋白，都在包涵体中，就是在破碎后的沉淀中，不知道该用什么方法去从包涵体中纯化出蛋白
赞一下 回复此楼
3楼2014-09-30 09:03:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

super_mm

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

1. 想要增加目的蛋白的溶解度，可以降低诱导温度30度 25度 22度试试，或者适当降低IPTG的浓度。
2. 包涵体蛋白更好纯化啊，不过看你的包涵体杂蛋白挺多，超声破碎的力度好像不大够啊，首先洗涤包涵体，你的缓冲液中加2M尿素，重悬下沉淀洗一洗后离心，然后溶解包涵体，用buffer加6-8M尿素重悬包涵体，最好过夜搅拌溶解，然后按照gst标签蛋白纯化方法纯化就行，只是所有溶液中都加上6-8M尿素，纯化以后再想办法复性，去除尿素保持目的蛋白的活性。
赞一下 回复此楼
4楼2014-10-13 10:18:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jza63

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by super_mm at 2014-10-13 10:18:19
1. 想要增加目的蛋白的溶解度，可以降低诱导温度30度 25度 22度试试，或者适当降低IPTG的浓度。
2. 包涵体蛋白更好纯化啊，不过看你的包涵体杂蛋白挺多，超声破碎的力度好像不大够啊，首先洗涤包涵体，你的缓冲液中 ...

我的诱导温度已经降到17℃了，还是只在包涵体中表达，感觉可能是因为蛋白分子量比较大，不好分泌表达。GST的蛋白包涵体溶解一般是在盐酸胍中吧，尿素的话对于上柱是有影响的，现在在尝试用SDS溶解，请问您对蛋白复性方面有什么见解，现在在发愁复性的问题，不知道如何配制复性液
赞一下 回复此楼
5楼2014-10-13 19:12:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenyuanxmc

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

可以尝试在低温，低诱导剂条件下，与伴侣蛋白共表达
赞一下 回复此楼
6楼2014-11-16 22:10:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

分子白痴

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by super_mm at 2014-10-13 10:18:19
1. 想要增加目的蛋白的溶解度，可以降低诱导温度30度 25度 22度试试，或者适当降低IPTG的浓度。
2. 包涵体蛋白更好纯化啊，不过看你的包涵体杂蛋白挺多，超声破碎的力度好像不大够啊，首先洗涤包涵体，你的缓冲液中 ...

请问有没有具体的纯化流程啊？急需啊，拜托拜托啊！
赞一下 回复此楼
7楼2016-05-09 22:11:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jza63 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 290求调剂 +6 材料专硕调剂； 2026-02-28 7/350 2026-03-01 09:21 by L135790
[考研] 291分工科求调剂 +5 science饿饿 2026-03-01 5/250 2026-03-01 09:19 by L135790
[论文投稿] 求助coordination chemistry reviews 的写作模板 10+3 ljplijiapeng 2026-02-27 4/200 2026-03-01 09:07 by babero
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[考研] 材料类求调剂 +7 wana_kiko 2026-02-28 7/350 2026-03-01 07:55 by ms629
[考研] 298求调剂 +5 axyz3 2026-02-28 5/250 2026-03-01 06:45 by 刘兵
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧？ +5 ieewxg 2026-02-25 6/300 2026-03-01 00:10 by addressing
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +5 Soliloquy_Q 2026-02-28 8/400 2026-02-28 23:36 by xyx2012xyx
[考研] 化工专硕348，一志愿985求调剂 +4 弗格个 2026-02-28 6/300 2026-02-28 22:00 by wang_dand
[考研] 材料学调剂 +5 提神豆沙包 2026-02-28 5/250 2026-02-28 21:34 by gaoxiaoniuma
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
[考研] 298求调剂 +8 人间唯你是清欢 2026-02-28 11/550 2026-02-28 20:26 by L135790
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
[考博] 博士自荐 +3 kkluvs 2026-02-28 3/150 2026-02-28 16:59 by StarAura
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
[考研] 304求调剂 +5 曼殊2266 2026-02-28 6/300 2026-02-28 12:44 by 迷糊CCPs
[硕博家园] 博士自荐 +6 科研狗111 2026-02-26 9/450 2026-02-28 12:32 by seaskyy
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭