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小不点yctc

新虫 (初入文坛)

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虫号: 2311827
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性别: MM
专业: 环境微生物学

[交流] 求助目的基因克隆表达问题已有1人参与

我做的两个基因的克隆表达，现在已经成功连上了pET28a表达载体，正在做诱导表达。
我们这边一般都是等到菌长到0.6----0.7的时候加IPTG诱导。我构建的这两个菌实验过程中条件都是一样的，唯一的区别就是两个构建的基因不同。
其中一个37度长2个半小时左右可以长到0.6以上，另一个37度培养2个半小时培养基还是很澄清，大概要长3个半小时才能达到0.6，该实验已经重复了3遍，每次都这样，求助，为什么？是质粒的影响吗？还是感受态的影响啊？需要重新做化转吗？各位大神求指导

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1楼 2014-09-25 11:20:55

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super_mm

木虫 (小有名气)

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在线: 21.7小时
虫号: 3467080
注册: 2014-10-11
性别: GG
专业: 抗体工程学

感觉质粒不会影响细菌的生长速度的啊，是不是你保存的菌种浓度或者活力不一样，你可以试试把两种原始菌都划个线，挑单菌落一样的培养条件养起来之后再用来当种子试试

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