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舟之行

铜虫 (正式写手)

[求助] 大家帮我分析一下qpcr结果 已有2人参与

1、DNA合成效率(E)为何如此之高？
2、荧光吸收为什么这么乱

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仿制药一致性评价，多肽及核酸类药物分析及代谢物分析
1楼 2014-09-22 19:35:39
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hlxxym

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
标曲效率超过100%的最大可能是你稀释得不准或者加样误差，导致实际的梯度与你在机器中定义的梯度并不相同。从图3的间距不等来看，这种可能很大，建议重新稀释，或者踢掉几个点。

另外，你的机器型号是什么？有的机器，例如ABI的step one和step one plus本身问题，需要进行加样矫正，也就是除了加sybr green还得再加个ROX染料。
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2楼2014-09-23 08:57:28
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舟之行

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hlxxym at 2014-09-23 08:57:28
标曲效率超过100%的最大可能是你稀释得不准或者加样误差，导致实际的梯度与你在机器中定义的梯度并不相同。从图3的间距不等来看，这种可能很大，建议重新稀释，或者踢掉几个点。

另外，你的机器型号是什么？有的 ...

这是bio-rad的最新机器，我们换机器lightclyer 96
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仿制药一致性评价，多肽及核酸类药物分析及代谢物分析
3楼2015-01-18 19:30:13
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hlxxym

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 舟之行 at 2015-01-18 19:30:13
这是bio-rad的最新机器，我们换机器lightclyer 96...

可能是标曲稀释不准或者加样不准   试试重新稀释一下
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4楼2015-01-19 09:30:23
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huangchj03

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

好好看看你这组数据的精密度吧，如果是操作的问题的话：典型的加样不准或模板稀释梯度问题，这样的话考虑移液器是否需要校准和模板稀释时手法是否合理；如果设备的问题的话，考虑设备是否需要校准，一般荧光定量PCR仪一年要官方校准一次，简单做法查看以往实验记录是否有固定的异常值或按照常规检测手段对设备进行测试。祝好
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5楼2015-01-21 11:49:11
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