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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » SDS-PAGE电泳跑牛血红蛋白
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晨光雨露

铜虫 (初入文坛)

[求助] SDS-PAGE电泳跑牛血红蛋白 已有5人参与

我用SDS-PAGE电泳分离牛血红蛋白，结果就是一个拖带，并没有一个一个的条带，不知道是哪里出现问题，求教，谢谢！
还有就是我想知道加样的牛血红蛋白要怎么处理，沸水浴5min是不是可以？
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1楼 2014-09-19 10:47:59
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liuzx984

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
晨光雨露(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-24 09:16:50
造成拖带的原因有几点，一是上样量太大，二是跑电泳的电流太大，三是合适的loading buffer。希望对你有所帮助。
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2楼2014-09-22 09:56:46
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hapliod

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
晨光雨露(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-24 09:17:10
蛋白加上带SDS 和BME loading buffer， 煮5min, 冰上放1-2min,然后上样。
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3楼2014-09-24 01:50:14
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晨光雨露

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hapliod at 2014-09-24 01:50:14
蛋白加上带SDS 和BME loading buffer， 煮5min, 冰上放1-2min,然后上样。

loading buffer也要煮吗？
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4楼2014-09-24 08:48:33
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晨光雨露

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liuzx984 at 2014-09-22 09:56:46
造成拖带的原因有几点，一是上样量太大，二是跑电泳的电流太大，三是合适的loading buffer。希望对你有所帮助。

浓缩胶150V，分离胶200V，应该还好吧，loading buffer是自己配的，之前用过
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5楼2014-09-24 08:49:58
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867575969

至尊木虫 (著名写手)

One Piece

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by hapliod at 2014-09-24 01:50:14
蛋白加上带SDS 和BME loading buffer， 煮5min, 冰上放1-2min,然后上样。

sds和蛋白样品应该按多少体积一起煮沸?
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有些东西因为得不到而变得美好，有些东西因为拥有而变得弥足珍贵！
6楼2014-09-24 09:14:31
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晨光雨露

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 867575969 at 2014-09-24 09:14:31
sds和蛋白样品应该按多少体积一起煮沸?...

SDS是加在loading buffer里面的
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7楼2014-09-25 08:37:29
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867575969

至尊木虫 (著名写手)

One Piece

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 晨光雨露 at 2014-09-25 08:37:29
SDS是加在loading buffer里面的...

体积比是loading Buff：蛋白占样品溶液=1:4吗？？？
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有些东西因为得不到而变得美好，有些东西因为拥有而变得弥足珍贵！
8楼2014-09-25 11:44:03
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ahryue

木虫 (正式写手)

云雀恭弥

【答案】应助回帖

★
晨光雨露(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-04 22:05:01
引用回帖:
5楼: Originally posted by 晨光雨露 at 2014-09-24 08:49:58
浓缩胶150V，分离胶200V，应该还好吧，loading buffer是自己配的，之前用过...

电压好大，90和180的飘过，也和浓度有关

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9楼2014-09-25 12:19:41
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李战士

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

拖带是电泳技术问题。只有一条带可能没加巯基乙醇或DTT了。

[ 发自小木虫客户端 ]
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其实有很多事我们都知道，只是不愿意说出来
10楼2014-09-25 12:34:23
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